研究背景：为什么要开展这项研究？
肥胖诱发的慢性炎症（meta-inflammation），会引发代谢器官（如肝脏与脂肪组织）的免疫系统紊乱，进一步导致脂肪肝和2型糖尿病。为深入研究这些免疫变化，荷兰莱顿大学医学中心开发了一套30色光谱流式抗体组合方案，专用于小鼠肝脏和白色脂肪组织中免疫细胞的检测，尤其聚焦于巨噬细胞亚群及其活化状态。
 
所用平台是什么？使用CytoFLEX mosaic的意义何在？
该研究在CytoFLEX LX流式细胞仪上搭载CytoFLEX mosaic光谱检测模块进行实验，验证了OMIP-104抗体组合方案在该平台上的兼容性与性能。
实验重点考察了三方面：

• 抗体panel在肝脏样本的移植便捷性
• CytoFLEX mosaic平台下的检测性能
• 对复杂组织样本中自体荧光的解混能力

 
实验方法：如何进行样本准备与染色？

• 采用文献[1]中OMIP-104方案的制备与染色方法。
• 小鼠饲喂高脂高胆固醇西式饲料，富集肝脏CD45+免疫细胞。
• 将6只雄性小鼠的白细胞混合分析。
• 单染对照、FMO对照和自体荧光检测按标准流程执行。

如需详细步骤，可参阅文献1的补充材料。
 
结果展示：数据图解析及平台性能

图1：荧光染料相似性矩阵
使用CytExpert for Spectral软件生成，复杂度评分为11.0，评估panel中染料间的光谱重叠程度。

图2：荧光光谱预览图
展示本抗体组合的完整光谱特征，便于评估染料组合互补性。

图3：设门策略与FMO对照
A) 明确区分主要免疫细胞群，如CD45+CD31-白细胞。
B) 针对多个活化标志物进行FMO控制，确保门策略科学可靠。

图4：多重自体荧光解混效果
A) 单种自体荧光特征解混
B) 多达4种特征联合处理，显著提升肝脏样本中信噪比。
数据分析通过Cytobank平台完成。
 
结论总结：CytoFLEX mosaic的优势体现在哪里？

• 虽然OMIP-104原方案非专为CytoFLEX mosaic设计，但本研究验证其可无缝移植。
• 使用mosaic模块后，成功鉴定出全部关键免疫群体。
• 若进一步重新滴定抗体浓度并采用适配808 nm激光的荧光染料，panel性能可再次优化。
• 本研究为将其他平台抗体组合方案迁移至CytoFLEX mosaic光谱平台提供了实证参考，增强了其在高维免疫分析中的灵活性与兼容性。

 
技术亮点回顾
双擎驱动，洞见多维
CytoFLEX mosaic采用双光学路径 + 双算法引擎设计，搭配智能化操作软件，显著提升多参数光谱流式分析的灵活性与准确性，助力科研人员实现高维单细胞免疫图谱的构建与解译。
 
引用参考

1. Lambooij JM, Tak T, Zaldumbide A, Guigas B. OMIP-104: A 30-color spectral flow cytometry panel for comprehensive analysis of immune cell composition and macrophage subsets in mouse metabolic organs. Cytometry. 2024;105(7):493–500.