AC16人心肌细胞的培养复苏和常见问题解答
2025-08-27 来源:本站 点击次数:62
【细胞介绍】
AC16是一种由成人心脏心室组织的原代细胞与经SV40转化的尿苷营养缺陷型的人成纤维细胞（缺乏线粒体DNA）融合而来的杂交细胞系，显示出心肌细胞的典型特征，包括转录因子如GATA4、MYCD、NFATc4的表达，以及收缩蛋白如α -和β -肌球蛋白重链。AC16细胞也表达间隙连接蛋白connexin-43和connexin-40，染料偶联研究证实其具有功能性间隙连接，强调其在心肌细胞研究中的应用。当SV40癌基因被沉默时，AC16转变为更分化的状态，以BMP2的表达为标志，表明心脏分化和发育调节。
科学家们采用各种技术，包括干细胞分化、动物模型、分子分析和生物标志物发现，来推进心脏相关疾病的知识和潜在治疗。有丝分裂原和衰老途径的参与，以及胸苷激酶的诱导，进一步阐明了人类心肌细胞的复杂性及其对病理条件的反应。
AC16人心肌细胞系具有模仿成熟心肌细胞行为的能力，使其成为心脏研究的一个有价值的模型。它与原代心肌细胞的遗传组成非常相似，允许在体外研究心脏发育、病理和组蛋白丢失的含义，然而，心肌细胞的行为和遗传复杂性可能与原代或干细胞衍生的心肌细胞不完全匹配。在毒理学和心血管疾病研究的背景下，AC16细胞是了解心肌细胞发育、炎症、损伤、再生和毒理学效应的重要工具。
AC16人类心肌细胞细胞系的独特特性，包括其对发育线索的反应和模拟人类心肌细胞生理条件的能力，使其成为解开心脏病奥秘和设计新的治疗干预措施的有用模型。
以下是中乔新舟拍摄的AC16细胞拍摄的在不同放大倍数下的图片：
4X
10X
20X
细胞名称：AC16人心肌细胞
细胞别称：AC16；AC16 [Human hybrid cardiomyocyte]
产品货号：ZQ0960
生长特性：贴壁
培养条件 ：DMEM/F12基础培养基（中乔新舟 货号：ZQ-600）+10%胎牛血清 (品牌：中乔新舟 货号：ZQ500-A）+1%P/S（品牌：中乔新舟 货号：CSP006）
完全培养基货号：ZM0960
【细胞传代】
1.细胞有脱落情况时，将培养液转移到无菌离心管中，离心（125g，3～5分钟）1000-1200rmp收集悬浮细胞（漂浮细胞少，可能无沉淀，大部分在管壁上）；轻柔去除培养基，等贴壁细胞消化收集在一起混匀接种。
2.贴壁细胞用PBS洗1~2次，每次3-5ml，添加1ml 胰酶（0.25% 含EDTA）到细胞瓶中，轻轻摇匀，使胰酶溶液铺满细胞表面，放入培养箱中。1-3min后取出到显微镜下观察，(若细胞无变化继续放入培养箱消化)一旦细胞变圆、轻拍瓶尾部大部分细胞开始脱落，当达到70-80%细胞漂浮脱落，立即加入5ml完全培养基(含10%FBS)中和。用移液管轻轻吹打6-8次，使细胞充分解离。
3.将细胞悬液转移到无菌离心管中，计数，离心收集细胞。用适量完全培养基重悬细胞沉淀，使细胞密度为每毫升0.6-2X105。将细胞悬液转至培养瓶中，静置于培养箱中。建议T25培养瓶添加5-7ml完全培养基，以后2-3天进行换液。
【细胞冻存】
1.细胞密度80%以上，活细胞百分率达95%以上时，将细胞按照以上步骤进行消化收集细胞沉淀进行冻存。
2.细胞沉淀用适量4°C冻存液（货号：CSP042）重悬， 建议一瓶T25细胞冻存一管（1ml/管），直接将分装好的细胞冻存管置于-80℃超低温冰箱中过夜，若需液氮长期保存，需先置于-80℃至少一天后方可转至液氨罐中。
NOTE:若不是我司冻存液请按照冻存液说明书操作，若是自配冻存液需梯度降温冻存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min，-80℃放置一天后转移至液氮保存)或使用程序降温盒降温后，再转移至液氮中保存。
【细胞复苏】
1.液氮取出的细胞放入干冰中转移到细胞房，提前准备好完全培养基，离心管。
2.冻管细胞在37°C水浴中迅速解冻（大约1-2分钟）。为了减少污染的可能性，保持冻管瓶盖在水浴液面之上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻管外壁。
3.将内容物转移到含3-6mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀，离心（125 g，3～5分钟）1000-1200rmp去除培养基， 细胞沉淀用手指弹松，添加3ml完全培养基混匀细胞并进行计数，用适量完全培养基将细胞密度调整至0.6-2.0X105，转移至培养瓶中，于培养箱中静置培养。建议T25培养瓶添加5-7ml完全培养基。当密度达到80%以上时传代。
【常见问题】
1、何时须更换培养基
视细胞生长密度而定，常规细胞2-3天更换培养基。
2、何时进行传代
细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养
首次传代建议1：2传代，就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。
3、可否使用与原先不同培养基
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，易造成细胞状态不好，最终造成细胞无法存活。
4、可否使用与原先不同血清种类
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
【发表过的文献】
截至到2024年，引用中乔新舟该细胞发表过的文献总数9篇，总的影响因子54.2，最高影响因子12.70，数据如下：
下面列举了几篇代表性的文献，可以参考：
1.论文题目：TRIM21 promotes ubiquitination of SARS-CoV-2 nucleocapsid protein to regulate innate immunity.
期刊： JOURNAL OF MEDICAL VIROLOGY 影响因子：12.7
2.论文题目：PCSK6 attenuates cardiac dysfunction in doxorubicin-induced cardiotoxicity by regulating autophagy.
期刊： FREE RADICAL BIOLOGY AND MEDICINE 影响因子：7.4
3.论文题目：Altered Expression of Transfer-RNA-Derived Small RNAs in Human With Rheumatic Heart Disease.
期刊： Frontiers in Cardiovascular Medicine 影响因子：6.05
4.论文题目：GSK-J4, a Specific Histone Lysine Demethylase 6A Inhibitor, Ameliorates Lipotoxicity to Cardiomyocytes via Preserving H3K27 Methylation and Reducing Ferroptosis.
期刊： Frontiers in Cardiovascular Medicine 影响因子：5.846
5.论文题目：Knockdown of KLF6 ameliorates myocardial infarction by regulating autophagy via transcriptional regulation of PTTG1.
期刊： AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY-CELL PHYSIOLOGY 影响因子：5.0
AC16是一种由成人心脏心室组织的原代细胞与经SV40转化的尿苷营养缺陷型的人成纤维细胞（缺乏线粒体DNA）融合而来的杂交细胞系，显示出心肌细胞的典型特征，包括转录因子如GATA4、MYCD、NFATc4的表达，以及收缩蛋白如α -和β -肌球蛋白重链。AC16细胞也表达间隙连接蛋白connexin-43和connexin-40，染料偶联研究证实其具有功能性间隙连接，强调其在心肌细胞研究中的应用。当SV40癌基因被沉默时，AC16转变为更分化的状态，以BMP2的表达为标志，表明心脏分化和发育调节。
科学家们采用各种技术，包括干细胞分化、动物模型、分子分析和生物标志物发现，来推进心脏相关疾病的知识和潜在治疗。有丝分裂原和衰老途径的参与，以及胸苷激酶的诱导，进一步阐明了人类心肌细胞的复杂性及其对病理条件的反应。
AC16人心肌细胞系具有模仿成熟心肌细胞行为的能力，使其成为心脏研究的一个有价值的模型。它与原代心肌细胞的遗传组成非常相似，允许在体外研究心脏发育、病理和组蛋白丢失的含义，然而，心肌细胞的行为和遗传复杂性可能与原代或干细胞衍生的心肌细胞不完全匹配。在毒理学和心血管疾病研究的背景下，AC16细胞是了解心肌细胞发育、炎症、损伤、再生和毒理学效应的重要工具。
AC16人类心肌细胞细胞系的独特特性，包括其对发育线索的反应和模拟人类心肌细胞生理条件的能力，使其成为解开心脏病奥秘和设计新的治疗干预措施的有用模型。
以下是中乔新舟拍摄的AC16细胞拍摄的在不同放大倍数下的图片：
4X
10X
20X
细胞名称：AC16人心肌细胞
细胞别称：AC16；AC16 [Human hybrid cardiomyocyte]
产品货号：ZQ0960
生长特性：贴壁
培养条件 ：DMEM/F12基础培养基（中乔新舟 货号：ZQ-600）+10%胎牛血清 (品牌：中乔新舟 货号：ZQ500-A）+1%P/S（品牌：中乔新舟 货号：CSP006）
完全培养基货号：ZM0960
【细胞传代】
1.细胞有脱落情况时，将培养液转移到无菌离心管中，离心（125g，3～5分钟）1000-1200rmp收集悬浮细胞（漂浮细胞少，可能无沉淀，大部分在管壁上）；轻柔去除培养基，等贴壁细胞消化收集在一起混匀接种。
2.贴壁细胞用PBS洗1~2次，每次3-5ml，添加1ml 胰酶（0.25% 含EDTA）到细胞瓶中，轻轻摇匀，使胰酶溶液铺满细胞表面，放入培养箱中。1-3min后取出到显微镜下观察，(若细胞无变化继续放入培养箱消化)一旦细胞变圆、轻拍瓶尾部大部分细胞开始脱落，当达到70-80%细胞漂浮脱落，立即加入5ml完全培养基(含10%FBS)中和。用移液管轻轻吹打6-8次，使细胞充分解离。
3.将细胞悬液转移到无菌离心管中，计数，离心收集细胞。用适量完全培养基重悬细胞沉淀，使细胞密度为每毫升0.6-2X105。将细胞悬液转至培养瓶中，静置于培养箱中。建议T25培养瓶添加5-7ml完全培养基，以后2-3天进行换液。
【细胞冻存】
1.细胞密度80%以上，活细胞百分率达95%以上时，将细胞按照以上步骤进行消化收集细胞沉淀进行冻存。
2.细胞沉淀用适量4°C冻存液（货号：CSP042）重悬， 建议一瓶T25细胞冻存一管（1ml/管），直接将分装好的细胞冻存管置于-80℃超低温冰箱中过夜，若需液氮长期保存，需先置于-80℃至少一天后方可转至液氨罐中。
NOTE:若不是我司冻存液请按照冻存液说明书操作，若是自配冻存液需梯度降温冻存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min，-80℃放置一天后转移至液氮保存)或使用程序降温盒降温后，再转移至液氮中保存。
【细胞复苏】
1.液氮取出的细胞放入干冰中转移到细胞房，提前准备好完全培养基，离心管。
2.冻管细胞在37°C水浴中迅速解冻（大约1-2分钟）。为了减少污染的可能性，保持冻管瓶盖在水浴液面之上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻管外壁。
3.将内容物转移到含3-6mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀，离心（125 g，3～5分钟）1000-1200rmp去除培养基， 细胞沉淀用手指弹松，添加3ml完全培养基混匀细胞并进行计数，用适量完全培养基将细胞密度调整至0.6-2.0X105，转移至培养瓶中，于培养箱中静置培养。建议T25培养瓶添加5-7ml完全培养基。当密度达到80%以上时传代。
【常见问题】
1、何时须更换培养基
视细胞生长密度而定，常规细胞2-3天更换培养基。
2、何时进行传代
细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养
首次传代建议1：2传代，就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。
3、可否使用与原先不同培养基
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，易造成细胞状态不好，最终造成细胞无法存活。
4、可否使用与原先不同血清种类
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
【发表过的文献】
截至到2024年，引用中乔新舟该细胞发表过的文献总数9篇，总的影响因子54.2，最高影响因子12.70，数据如下：
下面列举了几篇代表性的文献，可以参考：
1.论文题目：TRIM21 promotes ubiquitination of SARS-CoV-2 nucleocapsid protein to regulate innate immunity.
期刊： JOURNAL OF MEDICAL VIROLOGY 影响因子：12.7
2.论文题目：PCSK6 attenuates cardiac dysfunction in doxorubicin-induced cardiotoxicity by regulating autophagy.
期刊： FREE RADICAL BIOLOGY AND MEDICINE 影响因子：7.4
3.论文题目：Altered Expression of Transfer-RNA-Derived Small RNAs in Human With Rheumatic Heart Disease.
期刊： Frontiers in Cardiovascular Medicine 影响因子：6.05
4.论文题目：GSK-J4, a Specific Histone Lysine Demethylase 6A Inhibitor, Ameliorates Lipotoxicity to Cardiomyocytes via Preserving H3K27 Methylation and Reducing Ferroptosis.
期刊： Frontiers in Cardiovascular Medicine 影响因子：5.846
5.论文题目：Knockdown of KLF6 ameliorates myocardial infarction by regulating autophagy via transcriptional regulation of PTTG1.
期刊： AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY-CELL PHYSIOLOGY 影响因子：5.0
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