1.1 方法原理
分光光度法
壳聚糖经盐酸水解生成氨基葡萄糖，氨基葡萄糖在碱性条件下与乙酰丙酮缩合形成生色原2-甲基-3-二乙酰吡咯衍生物。生色原与对二甲氨基苯甲醛在酸性条件下反应生成紫红色化合物，在波长525nm处测定其吸光度，在一定浓度范围内，该化合物的吸光度与氨基葡萄糖浓度成正比，由此可以用分光光度法测定。

1.2试剂
所用试剂和溶液的配制，在未注明规格和配制方法时，均按HG/T3696规定执行。高效液相色谱法用水为超纯水，分光光度法用水为三级去离子水。
乙腈（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；三氯甲烷；浓盐酸；氨基葡萄糖盐酸盐标准品；无醛乙醇（95%以上）；乙酰丙酮；壳聚糖1（脱乙酰度80%～95%）；壳聚糖2（脱乙酰度大于95%）。
盐酸溶液（1+1）：盐酸与水体积比为1∶1。
盐酸溶液（0.3mol/L）：量取盐酸27mL，再加水稀释至1L。
盐酸溶液（8mol/L）：量取盐酸680mL，再加水稀释至1L。
氢氧化钠溶液（10mol/L）：称取氢氧化钠400g，先用少量水溶解后，再加水稀释至1L。
氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取氢氧化钠40g，先用少量水溶解后，再加水稀释至1L。
氢氧化钠溶液（0.3mol/L）：称取氢氧化钠12g，先用少量水溶解后，再加水稀释至1L。
PMP甲醇溶液（0.5mol/L）：称取8.71g PMP，用甲醇溶解后，转移至100mL容量瓶中用甲醇定容。
磷酸二氢钾溶液（0.1mol/L）：采用超纯水配制，调节pH至6.7，过0.45μm水系微孔滤膜后备用（现用现配）。
碳酸钠溶液（0.5mol/L）：称取碳酸钠53g，置于500mL烧杯中，用水溶解后，转移至1000mL容量瓶中用水定容。
乙酰丙酮溶液：移取乙酰丙酮2.0mL，用碳酸钠溶液（0.5mol/L）定容至50mL，于冰箱中放置过夜。
对二甲氨基苯甲醛溶液：称取对二甲氨基苯甲醛0.8g，溶于无醛乙醇15mL及浓盐酸15mL中，混匀（现用现配）。
氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液（1.00g/L）：称取氨基葡萄糖盐酸盐0.100g，置于100mL烧杯中，用水溶解后，转移至100mL容量瓶中用水定容。
氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液（20.0 μg/mL）：移取氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液（1.00g/L）2.00mL至100mL容量瓶中，用水定容（现用现配）。

1.3仪器
紫外可见分光光度计，配1cm比色皿；电子分析天平。

1.4供试样品
样品来源于肥料生产企业的肥料产品。

1.5样品前处理
1.5.1 试样的制备
将固体样品采用四分法缩分至约100g，将其迅速研磨至全部通过0.50mm孔径试验筛（如样品潮湿，可通过1.00mm孔径试验筛），混合均匀，置于洁净、干燥的容器中；液体样品经摇动均匀后，迅速取出约100mL，置于洁净、干燥的容器中。

1.5.2 试样溶液的制备
称取混合均匀的0.5～1g固体试样或5～10g液体试样（精确至0.0001g，以含壳聚糖200～400mg为佳），置于100mL容量瓶中，先加入1.0mL浓盐酸，然后加入水溶解后定容。移取1.00mL溶液至水解管中，加入1.0mL浓盐酸和8.0mL盐酸溶液（1+1），封管后于100℃水解24h。水解完成后，转移至烧杯中，加入氢氧化钠溶液（10mol/L） 6mL后用盐酸溶液（0.3mol/L）和氢氧化钠溶液 （0.3mol/L）调节pH至7.0，然后转移至100mL容量瓶中，用水定容。

1.7标准曲线的绘制
分光光度法
分别移取氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液（20.0 μg/mL）0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL置于7个具塞试管中，用水补充至5.00mL，该标准系列溶液含氨基葡萄糖盐酸盐的量分别为0、10.0、 20.0、40.0、60.0、80.0、100.0 μg。分别加入乙酰丙酮溶液1.00mL，混匀，置于沸水浴中（1min后盖塞）放置25min，取出，用冰水迅速冷却至室温，加入无醛乙醇3.00mL，再加入对二甲氨基苯甲醛溶液1.00mL，混匀，于60℃水浴中（5min后盖塞） 放置1h，取出立即用冷水冷却至室温，在波长525nm处，用1cm比色皿进行比色，以含氨基葡萄糖盐酸盐0 μg的标准溶液调零，读取吸光度。以标准系列溶液含氨基葡萄糖盐酸盐的质量（μg）为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

1.8试样溶液的测定
分光光度法
准确移取试样溶液1.00～5.00mL（含氨基葡萄糖盐酸盐10～100 μg）置于具塞试管中，用水补充至5.00mL，在与测定标准系列溶液相同的条件下显色、比色，以空白实验溶液调零，读取吸光度，在标准曲线上查出相应氨基葡萄糖盐酸盐的质量（μg）。在测定过程中，若试样溶液在加入显色剂之前有颜色，则应于另一具塞试管中，加入相同体积的试样溶液，除显色阶段用1.00mL盐酸溶液 （1+1）代替对二甲氨基苯甲醛溶液外，其余操作相同，测定吸光度，计算时扣除该吸光度。