在类器官研究中，“看清楚” 是 “研究透” 的前提 —— 不同发育阶段、不同研究目标，需要搭配不同的成像技术。结合 3D 细胞培养与监测方案及高分辨率 3D 成像方案，我们梳理出类器官相关三类核心成像技术的适用场景，精准匹配实验需求，实现类器官的 “形态、功能、动态” 多维度研究需求
 
Part.01
长时程高内涵动态成像：活细胞 “全程追踪”，适配高通量、动态的研究场景
这类技术以 “不干扰生长、全周期记录、多参数分析” 为核心，通过模拟体内培养环境（稳定温湿度、精准气体控制），实现类器官从形成到响应外界刺激的动态监测，尤其适合需要 “长时间、无间断、量化分析” 的研究场景。
核心技术特点
依托 BioTek Cytation™成像系统 + BioSpa8 自动化培养模块 + MultiFlo FX 无损换液系统，可实现：
无人值守培养：8 位独立培养位，精准控制 CO₂/O₂浓度、温度（最高 45℃）和湿度，避免人为操作干扰；
动态成像与量化：明场观察类器官成球过程，荧光场追踪标记分子（如 GFP 标记 CD29），Gen5 软件自动输出体积、荧光强度等参数；
无损处理：AMX 模块实现 自动化3D 细胞球无损伤换液后续操作。
适配研究场景
 
 
1. 类器官培养条件优化与质量监测
需求：筛选最佳培养基配方、接种密度，确保类器官形态均一、活性稳定（如干细胞类器官成球率、肿瘤类器官侵袭能力一致性）；
应用：通过明场动态成像，对比不同接种密度（如 1k / 孔、5k / 孔、10k / 孔）下类器官的成球时间、直径分布，结合活细胞荧光染料（如 Calcein AM）评估活性，快速确定最优培养条件；
2. 活细胞动态追踪类研究（如 CAR-T 细胞杀伤、干细胞分化）
需求：实时观察细胞间相互作用（如 CAR-T 细胞与肿瘤类器官的结合、杀伤过程），或长时程追踪细胞状态变化（如干细胞向特定细胞类型分化）；
应用：
CAR-T 研究：用荧光标记 CAR-T 细胞（如 RFP 标记）和肿瘤类器官（GFP 标记），连续 24-48 小时监测 CAR-T 细胞向类器官的迁移、浸润及类器官的形态崩解，量化杀伤效率；
Part.02
多重免疫荧光成像：细胞 “身份识别”，解析类器官功能异质性
类器官是 “功能异质性” 的细胞集合体（如乳腺类器官含 luminal 细胞、基底细胞，肾类器官含肾小管细胞、肾小球细胞），多重免疫荧光通过特异性标记 “功能标志物”，精准区分细胞类型、定位功能区域，适配需解析细胞组成与功能的场景。
 
核心技术特点
多标志物同时标记：可结合 4-6 种荧光染料（如 DAPI、GFP、Texas Red、CY5），分别标记细胞核、细胞骨架、特异性蛋白；
高特异性：依赖单克隆抗体与抗原的特异性结合（如用抗 E-cadherin 抗体标记上皮细胞连接，抗 MMP-14 抗体标记肿瘤侵袭细胞）；
类器官免疫化模型等：对细胞互作，空间位置关系等进行分析。
适配研究场景
 
1. 类器官细胞组成与功能验证
需求：确认类器官是否分化出目标细胞类型，或验证特定细胞的功能（如肝类器官的胆汁分泌、胰类器官的胰岛素分泌）。
应用：
疾病建模与发病机制研究
模拟疾病状态下类器官的细胞组成变化（如囊性纤维化（CF）肠道类器官的腔道结构异常、阿尔茨海默病脑类器官的神经元损伤）。
2.细胞间相互作用与信号通路研究
需求：观察类器官中不同细胞间的信号传递（如肿瘤细胞与成纤维细胞的旁分泌作用），或特定信号通路的激活状态（如 Wnt、Notch 通路）。
应用：
免疫治疗药物毒性对肠道类器官中免疫-上皮相互作用的影响
肿瘤类器官微环境分析：标记肿瘤细胞（抗 Her2 抗体）、基质细胞（抗 α-SMA 抗体）、免疫细胞（抗 CD45 抗体），解析肿瘤微环境中不同细胞的空间分布，探索相互作用机制；
Part.03
组织透明化 3D 成像：“穿透” 类器官，观察深层结构与空间关系
当类器官体积较大（直径 > 100μm）时，传统荧光成像因 “光线散射” 无法穿透深层，导致 “表面清晰、内部模糊”。组织透明化技术通过 “消除细胞与基质的折射率差异”，实现全深度 3D 成像，适配需观察类器官内部结构、空间分布的场景。
核心技术特点
 
简单安全：1 步透明（20 分钟室温孵育），不破坏荧光信号；
高兼容性：适配 confocal、多光子、光片显微镜，可观察 100-500μm 的类器官；
长期保存：透明后的类器官可在 - 20℃保存 6 个月，荧光信号损失 < 10%；
兼容多种标记策略：透明后可重新孵育抗体，进行二次标记。
适配研究场景
 
 
1. 类器官内部结构与空间形态分析
需求：观察类器官的三维结构（如肠道类器官的绒毛 - 隐窝结构、脑类器官的神经管结构），或评估结构完整性（如损伤后修复情况）；
应用：
肠道类器官：透明后用 confocal 进行 Z-stack 扫描，重建 3D 结构，观察隐窝区域的干细胞分布（Lgr5 + 细胞）与绒毛区域的分化细胞分布，量化隐窝数量与深度；
肺类器官：观察透明后的类器官内部纤毛的分布与运动状态，评估肺类器官的呼吸功能模拟能力；
2. 大体积类器官或类器官共培养的深层观察
需求：观察多细胞共培养类器官（如肿瘤类器官 + 成纤维细胞 + 免疫细胞）的深层细胞分布，或大体积类器官（如肝类器官球体）的内部功能区域；
应用：
肿瘤类器官共培养模型中，可能通过旁分泌信号增加药物敏感性。
3. 类器官发育过程中的结构动态变化
需求：追踪类器官从早期成球到成熟的内部结构变化；
应用：
类器官血管化：类器官透明化三维成像结果显示，含iLSEP的类器官（HLBO）中形成了CD32b⁺/FVIII⁺分支状的血管网络，其结构与胎儿肝脏中的窦状血管相似。
Part.04
多技术协同：构建类器官研究的完整解决方案
单一成像技术各有侧重，只有协同应用才能覆盖类器官研究的全需求：
动态追踪 + 功能标记：长时程成像记录类器官对药物的动态响应，多重免疫荧光标记特定功能细胞，可分析药物对不同细胞亚群的选择性作用（如肿瘤类器官中药物对肿瘤细胞与基质细胞的差异影响）；
功能标记 + 透明化成像：先通过多重免疫荧光定位功能细胞，再经透明化处理，用 3D 成像观察功能细胞在类器官内部的空间分布（如肝类器官中肝细胞与胆管细胞的三维排列）；
动态追踪 + 透明化成像：长时程监测类器官发育过程，定期取样进行透明化 3D 成像，可完整还原从早期成球到成熟结构形成的空间变化（如肾类器官从细胞团到肾小管、肾小球的发育历程）。

 
综上，类器官研究的核心需求在于还原其 “类体内” 的 3D 特性与动态变化，而长时程动态成像、多重免疫荧光成像、组织透明化 3D 成像的协同应用，正是满足这一需求的关键 —— 它们并非独立技术，而是相互补充、相互赋能的完整解决方案，推动类器官研究从 “定性观察” 走向 “定量、精准、系统的机制解析”。

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