2025年11月12日，来凯医药授予齐鲁制药在中国研究、开发和商业化AKT抑制剂LAE002（Afuresertib）的独家许可，来凯最高可获得总额高达20.45亿元人民币的里程碑款项。LAE002是一种有效的AKT抑制剂，可同时靶向AKT1、AKT2和AKT3三种亚型，精准满足HR+/HER2-乳腺癌的临床治疗需求。目前仅有阿斯利康AKT抑制剂Capivasertib获批用于HR+/HER2-乳腺癌上市销售，LAE002极有可能成为全球该领域第二款上市药物。

一、AKT 通路的生物学功能
AKT（也称为蛋白激酶B，PKB）是PI3K–AKT–mTOR信号通路的关键节点，在细胞存活、增殖、代谢、迁移等多个方面发挥核心作用。
1.抗凋亡：AKT 可通过磷酸化 Bad、caspase-9、caspase-3 等调控细胞凋亡，促进细胞存活。
2.促进增殖：AKT可磷酸化GSK-3β，从而稳定cyclin D1，并抑制细胞周期抑制子（如 p27、p21）表达，推动细胞周期进展。
3.促进血管生成：通过调控VEGF表达、eNOS活性等机制，AKT通路有助促进肿瘤血管生成。
4.通路异常与肿瘤关联：在多种癌症中，PI3K/AKT通路过度激活（如PI3K突变、AKT突变、PTEN缺失）是驱动化疗或靶向耐药的重要机制，与不良预后密切相关。

图：PI3K/Akt/mTOR轴

各种生长因子作用于跨膜受体并使其活化，PI3K信号通路也因此而激活。胞浆面PIP3浓度升高，作为第二信使与AKT的PH结构域结合分别使AKT Thr308和Ser473磷酸化导致AKT完全激活，继而磷酸化mTOR及其下游分子p70S6K、4E-BP1，下传生存信号。PTEN作为负调控因子，能使PIP3去磷酸将其转变为PIP2而降解，从而阻断AKT及其下游分子的有效活化。

From：QI H, FAN L. Zhongguo Fei Ai Za Zhi. 2010;13(12):1149-1154. doi:10.3779/j.issn.1009-3419.2010.12.13

二、AKT 抑制剂研发格局
尽管 AKT 是非常有前景的靶点，但目前真正进入临床的AKT抑制剂相对较少，但随着首款AKT抑制剂获批，AKT通路成为越来越多公司聚焦的核心靶点。

1. 阿斯利康：2023年11月， Capivasertib获FDA批准上市，与Fulvestrant(氟维司群)联合使用，用于治疗激素受体(HR)阳性、人表皮生长因子受体2(HER2)阴性、伴有一种或多种生物标志物改变(PIK3CA、AKT1或PTEN)的局部晚期或转移性乳腺癌成年患者。数据显示，2024年前三季度Capivasertib实现营收2.7亿美元，全年销量有望超4亿美元。

2. 来凯医药: 2024年5月，LAE002获FD批准III期临床试验方案，联合LAE001(CYP17A1/CYP11B2双重抑制剂)，治疗经过标准治疗后的转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)。

    2024年5月，LAE002在中国启动了III期关键临床试验AFFIRM-205，联合氟维司群，治疗局部晚期或转移性HR+/HER2-乳腺癌，用于治疗PIK3CA/AKT1/PTE改变的HR+/HER2-乳腺癌患者，目前项目进展顺利。

3.恒瑞医药和山东盛迪医药：2025年6月， HRS7415片获得《药物临床试验批准通知书》，资料显示，HRS7415片通过抑制AKT影响底物蛋白磷酸化，发挥抗肿瘤作用，累计研发费用约5482万元。

4.正大天晴：的NTQ1062是一款AKT抑制剂，数据显示，该产品于2021年5月头次申报临床，同年7月头次获批临床，并于8月头次登记启动 I 期临床针对实体瘤(登记号：CTR20211999)，目标入组21人，已于2021年9月完成头例受试者的入组工作。

默沙东的MK-2206、礼来的LY2780301、罗氏的Ipatasertib等均以失败告终。

三、AKT抑制剂研发中常用的表型检测指标
在药物发现和早期研发阶段，为了评估AKT抑制剂的作用和有效性，会使用一系列表型检测指标。

1.下游信号分子磷酸化水平
检测 AKT 本身被抑制后的磷酸化 (例如 p-AKT Ser473 / Thr308) 水平变化。下游靶标 (substrates) 磷酸化，例如 GSK-3β、4E-BP1、S6K、mTOR 靶点等，这些都是经典的 AKT-通路读出指标。可通过 Western blot、ELISA 、TR-FRET或流式细胞等技术来监测抑制效果。

（1）THUNDER TR-FRET 磷酸化蛋白检测
Phospho-AKT为例
THUNDER TR-FRET时间分辨荧光共振能量转移，检测技术灵敏度高，特异性好，重复性好，操作简单，仅需1~4h。一种基于荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer）和时间分辨荧光（TRF, Time-Resolved Fluorescence）的技术，采用夹心法，检测胞内AKT磷酸化水平和总AKT水平。

图3. THUNDER磷酸化蛋白检测原理示意图

用IGF-1处理MCF7细胞（60000个细胞/孔）室温下孵育10分钟。数据显示，不同酶标仪对信号的影响。用LY294002、Wortmannin和S961处理MCF7细胞（60000个/孔），在室温下孵育30分钟，然后用1µM胰岛素刺激细胞，在室温下孵育10分钟。数据显示，LY294002和Wortmannin可以抑制AKT蛋白S473位点的磷酸化，而S961则无抑制效果。

图. THUNDER Phospho-AKT (S473)验证数据

Phospho-GSK3β (S9)为例
用Insulin处理MCF7细胞（75000个细胞/孔）与IGF-1在室温下孵育30分钟。EC50为9.6nM。抑制剂UCN-01实验中，用UCN-01室温孵育MCF7细胞（75000个细胞/孔）2小时，再用Insulin孵育30分钟，可以看到GSK3β在S9位点磷酸化被抑制。

图. THUNDER Phospho- GSK3β（S9）验证数据

2. 细胞存活 / 凋亡指标
（1）细胞存活率 (viability)：使用 MTT / CCK-8 / LDH/CTG 等试剂检测细胞在给药后的存活变化。（CTG：UA070103，MTT：abs50010，CCK-8：abs50003，LDH：abs580274）
（2）凋亡 (apoptosis)：通过 Annexin V/PI 染色+流式细胞术 (flow cytometry)，或 Caspase 活性 (例如caspase-3/7) 检测来评估细胞是否进入凋亡。

UA-Glo® Caspase 3/7 Assay
即用型 Caspases 3/7细胞凋亡检测试剂盒用于定量检测细胞中 Caspases 3 和 7的活性。将该试剂加入待测细胞后，细胞裂解释出的 Caspases 3/7切割试剂中的 Caspases 3/7特异性的多肽荧光素偶联底物从而释出荧光素，试剂中的荧光素酶可以催化荧光素反应而产生光，光的强度和 Caspases 3/7的活性成正比关系。该试剂具有信噪比高、重复性好、稳定性好的特点。均质即用型的配方减少了实验准备和操作步骤，降低了因为多次加样导致的误差，且其稳定的辉光信号使该产品尤其适合高通量的化合物筛选。

图：加入检测试剂后30min-130min读取荧光值的剂量曲线，表格为计算所得的EC50值。

Caspases3/7细胞凋亡检测试剂检测化合物Staurosporine(STSP)对HeLa细胞凋亡的作用：4x10⁵/ml的HeLa细胞接种于96孔白板透明底培养板，100µl/孔。24小时后加入3倍稀释的STSP，37℃ 5%CO2孵育6h后按照Caspases3/7细胞凋亡检测试剂的说明进行Caspases3/7活性检测。

（3）减少抗凋亡信号 (如 Bcl-2, Bcl-xL) 或促进促凋亡蛋白 (例如 Bad, Bax) 的激活/表达，也是用来验证药物作用的指标。

3．代谢指标
AKT通路与细胞代谢 (如葡萄糖摄取、乳酸产生) 有深度关联。可测量葡萄糖摄入 (使用放射性或荧光糖类似物)、乳酸分泌 (lactate assay)、线粒体功能 (如ATP水平、线粒体膜电位) 等。

4. 杀伤功能检测
颗粒酶是由细胞毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞（NK）表达的丝氨酸蛋白酶家族，它们通过胞吐作用在溶酶体样颗粒中释放。颗粒酶B（GRANZYME B）在所有颗粒酶中具有最强的凋亡活性。

THUNDER Biomarker检测是基于双抗体夹心法，标记荧光供体和受体的Granzyme B抗体Eu-Ab1和FR-Ab2，分别与细胞上清中Granzyme B 结合，产生能量共振转移FRET（615nm），进而产生665nm荧光信号，荧光信号强度与Granzyme B浓度成正比。全程仅需2h，免洗，可高通量。检测灵敏度高，上限宽。

图：THUNDER Granzyme B 检测原理流程及标曲

5. 生物标志物检测
以Human VEGF为例
THUNDER细胞因子检测是基于双抗体夹心法，标记荧光供体和受体的VEGF抗体Eu-Ab1和FR-Ab2，分别与细胞上清中VEGF结合，产生能量共振转移FRET（615nm），进而产生665nm荧光信号，荧光信号强度与VEGF浓度成正比。全程仅需1.5h，免洗，可高通量。检测灵敏度高，上限宽，检测范围：14-30,000pg/ml

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