siRNA（小干扰 RNA）是介导RNA 干扰（RNAi） 的核心分子，通过特异性降解靶基因 mRNA，在转录后水平沉默基因表达，其作用机制可分为起始阶段和效应阶段，全程高度特异且高效，具体过程如下：

一、起始阶段：siRNA 的形成与装载
外源 siRNA（化学合成或体外转录生成）通常为21-23 nt 的双链 RNA，两条链分别为引导链（guide strand） 和过客链（passenger strand）。当 siRNA 进入细胞后，会被 RNA 诱导沉默复合体（RISC）识别并结合。RISC 中的核心组分（如 Argonaute 蛋白，Ago 蛋白）具有核酸酶活性，会切割并降解过客链，最终形成仅含引导链的活化 RISC 复合体。
引导链的5' 端稳定性是其被保留的关键：5' 端碱基配对越弱，越容易被 RISC 优先选择。

二、效应阶段：靶 mRNA 的识别与降解
活化的 RISC 复合体通过引导链的序列互补性，在细胞内搜寻靶 mRNA。
当引导链与靶 mRNA 的3' 非翻译区（3'UTR）或编码区发生完全互补配对时，Ago 蛋白的核酸酶结构域会被激活，在靶 mRNA 与引导链互补区域的中部（约第 10-11 位核苷酸处） 进行切割。

被切割后的靶 mRNA 失去稳定性，会被细胞内的核酸酶进一步降解，从而无法翻译为蛋白质，最终实现基因沉默。

siRNA作用机制

siRNA干扰关键特点
1、高度特异性：引导链与靶 mRNA 的互补配对长度仅需 19-21 nt，单碱基错配即可显著降低沉默效率，保证靶向精准性。
2、无基因组整合：siRNA 作用于细胞质中的 mRNA，不进入细胞核，因此不会改变宿主基因组，属于瞬时沉默（效应持续 3-7 天，随细胞分裂逐渐稀释）。
3、脱靶效应：若引导链与非靶基因 mRNA 存在部分互补，可能引发非特异性沉默，可通过化学修饰（如 2'-O - 甲基化）或优化序列降低该风险。