手动和 firefly 自动化铺板主要通过以下几个点进行比较：

1. Dome中心性和形态

2. 类器官生长速率

3. 孔间一致性

4. 手动操作时间
 

结果

如Figure 2所示，firefly分配模块在所有24个孔中均形成了球形规则、边缘清晰的Matrigel液滴，且其位置精准居中，展现出高度的一致性。这种优异的均一性和定位精度，即使是经验丰富的科研人员，在手动操作中也难以稳定复现，通常需要投入大量额外的时间和精力。

1.通过 firefly 铺板的类器官表现出良好的细胞活力

在为期7天的培养中，通过firefly系统铺板的类器官在数量和面积上均呈现持续增长，且形态学分析显示其处于健康状态：具备预期的尺寸、密度，并形成膜相对较薄的中空结构(Figure 5）。这些结果表明，firefly自动化铺板过程未对细胞活力及增殖潜力产生负面影响（Figure 3）。

2.手动和 firefly 铺板的类器官性能相当

在类器官的生长速率（数量与面积）上，firefly自动铺板与手动铺板的效果相当（Figure 3）。在形态方面，firefly所培养的类器官，其整体形态与表征“圆形度”的指标，也与手动对照组相当（Figure 5）。这些结果一致表明，两种铺板方式下类器官的生理状态高度一致。

3.使用 firefly 进行类器官铺板提高了孔间一致性

在类器官数量与生长面积方面，firefly 铺板孔间的变异性（cv）均小于手动铺板（Figure 3. 中阴影区域对比）。最为显著的是铺板初始阶段类器官数量的差异：尽管第 0 天时两类铺板的平均类器官数量相近，但手动铺板孔间呈现出显著更高的cv（Figure 4）。一致的铺板有利于类器官工作流程，它增强了实验设置的可靠性，减少了由接种环节引入的背景信号与不确定性，从而使实验结果更易解读。

此外，firefly 所铺类器官在形态与圆度上也表现出更低的cv（Figure 3 和Figure 5），尤其是在铺板初期。改善的“圆形度”可能意味着更多类器官处于良好的生理健康状态，这得益于 firefly 温和的液体分配能力。

结论和总结

本研究表明，与手动移液相比，firefly在接种100% Matrigel子宫内膜类器官提供了一种更高效且可扩展的新方法。结果显示，firefly自动化铺板和接种显著提升了孔间一致性，且在为期七天的培养中，类器官的生长与形态表现与手动对照相当。对于需要将小体积Matrigel精确点样于高密度板（96和384孔板）的高通量应用而言，此自动化方案优势尤为明显，可有效克服手动操作劳动强度大、重复性差的瓶颈。

firefly 在进行基质胶类器官接种时，相比于手动操作和传统工作站，具备以下优势：

• 对不同性质的液体兼容性高，胜任粘稠液体，包括100% Matrigel

• 配有温控模块，可保持Matrigel在低温的液体状态下进行细胞球接种

• 既能接种细胞和细胞换液，也能进行给药处理

• 分液速度快（最快30s 完成 384孔），细胞均一性高，CV值低

• 分液方式柔和，不会对形成的3D球产生冲击导致细胞损伤或球体冲散

• 加样定位精准，可以实现每个细胞dome分布于孔的正中，便于后续高内涵拍照观察

• 通量可提高至96和384孔板，降低3D细胞、试剂、Matrigel等的用量，通量和效率更高

• 自动化和标准化，节省人力，降低出错率，提高一致性和稳定性