利用荧光寿命光片显微镜进行活体功能成像
2026-03-03 来源:本站 点击次数:24光片显微镜已成为生物样品快速、低光毒性体积成像不可或缺的工具，主要以标准格式提供结构或分析物浓度数据。荧光寿命成像显微镜(FLIM)提供功能性对比度，但获取速度往往有限，且实施复杂。因此，我们将专用的频域CMOS FLIM相机和强度调制激光器集成到光片设置中，以增加荧光寿命成像功能，从而能够快速采集具有浓度独立对比度的体积数据。然后我们应用该系统对活体转基因斑马鱼进行成像，展示了从体内样本快速收集体积FLIM 数据的能力。
生物学中的许多重要悬而未决的问题都需要在体内以高时空分辨率对分子动力学进行成像。光片显微，在过去十镜，或选择性平面照明显微镜(SPIM)年中发展成为快速、低光漂白成像许多不同生物样品的首选方法，特别是在体内。
荧光终生成像显微镜(FLIM)是细胞生物学中实现浓度独立性的重要方法。特别是，使用时间相关单光子计数(TCSPC)技术的时域FLIM是使用FRET方法测量分子动态相互作用的金标准。
然而，测量寿命的精确度取决于数量，因此 TCSPC-FLIM 本质上是一个缓慢的过程，即使在多个处理器上多路复用时也是如此。这与在体内平行快速运动的细胞(如癌症或免疫细胞)中测量寿命信号的需要是不相容的。
频域(FD)-FLIM 可以比传统光子计数方法提高采集速度，但由于应用了调制频率，其寿命精度受到限制。然而，如果已知样品的预期寿命并适当匹配调制频率，FD-FLIM 是与广场显微镜集成的明智选择。其中只有光片可以提供快速的光学切片图像。我们将采用CMOS相机(pco.flim)和调制二极管激光器转换成数字扫描光片显微镜(DSLM)设置。以这种方式，我们结合的速度DSLM的三维成像与从FD-FLIM获得的功能信息。
在文中描述了以前在光片显微镜配置中实现荧光寿命成像的方法。分别成像MDCK囊肿和细胞球体。两项研究都使用了旋转透镜产生的光片，并在其设置中结合了门控图像增强器(GII)。
德国Excelitas PCO公司pco.flim CMOS相机，具备高分辨率、高感光度、弱光成像的优点，将显微研究实验过程完美记录，为实验提供强而有力的图像数据支持。
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