摘要     
显微CT在生物软组织成像中常面临对比度不足的问题，临界点干燥是提升图像质量的关键前处理步骤。本文系统介绍该技术的操作流程，并结合昆虫肌肉、脑部及幼虫器官三大案例，为相关领域研究者提供可复用的实验方案。
   
显微CT成像的挑战与突破     
传统的显微CT成像对骨骼、牙齿等高密度结构表现出色，但对于软组织结构，由于低原子序数元素的弱吸收特性，成像对比度常不理想。临界点干燥技术通过温和去除样本中的液体，最大程度减少组织收缩与变形，显著提升信噪比，是获取高质量三维重建数据的必备步骤。
 
三大案例展示临界点干燥的实际应用         
案例一：书蝎肌肉系统显微CT成像方法                     
样本类型      

• 物种：书蝎（Neobisium sp.）    
• 目标：肌肉系统三维结构可视化  Courtesy of Elisabeth Lipke and Dr. Peter Michalik, University of Greifswald, Germany.                

推荐标准化实验流程 （基于Leica EM CPD300）     
1、样本装载      

• 使用微孔样本罐，置于“滤片与多孔罐支架”中。   

2、固定与脱水      

• 70% 乙醇中固定，过夜    
•      乙醇梯度脱水：

1. 80% 乙醇，10分钟
2. ✫ 90% 乙醇，10分钟
3. ✫ 96% 乙醇，10分钟
4. ✫ 100% 乙醇，2次，每次10分钟   

3、染色      

• 使用1% 碘乙醇溶液（溶于100%乙醇）过夜染色    
• 100% 乙醇冲洗2次，每次10分钟   

4、临界点干燥      

• 使用Leica EM CPD300全自动程序处理     

5、扫描      

• 干燥样本粘附于样品台上    
• 使用X射线显微CT系统扫描       

案例二：苍蝇脑部神经结构显微CT成像方法                     
样本类型      
物种：绿头苍蝇（Lucilia caesar）    
目标：脑部神经解剖结构三维重建 Courtesy of Elisabeth Lipke and Dr. Peter Michalik, University of Greifswald, Germany.               

推荐标准化实验流程 （基于Leica EM CPD300）     
1、样本装载      

• 样本单独放置于“节肢动物支架”的腔室中。   

2、固定与脱水      

• Bouin固定液过夜固定    
• 0.1 M磷酸缓冲液（含1.8%蔗糖，pH 7.2）冲洗3次，每次10分钟    
• 乙醇梯度脱水：

1. ✫ 60%、70%、80%、90%、96%、100%乙醇，每步10分钟
2. ✫ 100%乙醇重复2次   

3、染色      

• 1% 碘乙醇溶液过夜染色    
• 100% 乙醇冲洗2次，每次10分钟   

4、临界点干燥      

• 使用Leica EM CPD300全自动程序处理     

5、扫描      

• 干燥样本粘附于样品台上    
• 使用X射线显微CT系统进行高分辨率扫描       

案例三：红血虫幼虫器官系统显微CT成像方法                     
样本类型      

• 物种：摇蚊幼虫（红血虫）    
• 目标：幼虫内部器官系统三维重建 Courtesy of Elisabeth Lipke and Dr. Peter Michalik, University of Greifswald, Germany. 

推荐标准化实验流程 （基于Leica EM CPD300）     
1、样本装载      

• 样本单独放置于“节肢动物支架”腔室中。   

2、固定与脱水      

• 2.5% 戊二醛（溶于0.1 M磷酸缓冲液）过夜固定    
• 0.1 M磷酸缓冲液（含1.8%蔗糖，pH 7.2）冲洗3次，每次10分钟    
• 乙醇梯度脱水：

1. ✫ 60%、70%、80%、90%、96%、100%乙醇，每步10分钟
2. ✫ 100%乙醇重复2次   

3、染色      

• 1% 碘乙醇溶液过夜染色    
• 100% 乙醇冲洗2次，每次10分钟   

4、临界点干燥      

•  使用Leica EM CPD300全自动程序处理   

5、扫描      

• 干燥样本粘附于样品台上    
• 使用X射线显微CT系统扫描    

技术总结        
以上三种方法均采用：  

• 标准化乙醇梯度脱水    
• 碘乙醇染色增强对比    
• Leica EM CPD300全自动干燥    
• 显微CT系统扫描   

流程可根据样本硬度、大小与结构复杂度进行微调，适用于绝大多数昆虫及软体生物样本的显微CT前处理。    

仪器推荐：Leica EM CPD300        
全自动操作，温控精准，样本放进去就不用管了，简直是实验室的“干燥神器”！
   
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