• 氯化铝(AlCl₃)溶液：通过溶解AlCl₃, 6H2O于海水中，制备含铝的母液；
• GACP溶液：研究人员搭建了一个电化学装置，通过外加电流促使真实的铝基原电池阳极（成分与工业用一致）在海水中溶解，从而获得含有铝、锌、铁、铟等多种元素的真实“混合物”母液。

所有母液均经过沉淀和过滤，将这些母液稀释成一系列浓度梯度，用于后续实验。

3. 急性毒性实验（胚胎-仔鱼阶段）
暴露方式：将海洋Oryzias melastigma胚胎分别暴露于不同浓度的氯化铝溶液、GACP溶液以及阴性对照（清洁海水）和阳性对照（3,4-dichloroaniline）中，持续12天，直至孵化（图1）。

观测指标：
发育毒性：每天在显微镜下观察胚胎发育情况，记录死亡率、孵化率、孵化时间以及各种形态畸形（如脊柱弯曲、心包水肿等）。

生长指标：在12天后，测量仔鱼的体长。

实验使用了诺达思的斑马鱼行为轨迹跟踪系统(DanioVision)。将仔鱼放入24孔板，适应后，经历“黑暗-光照-黑暗-光照”的特定光刺激序列。系统通过动物运动轨迹跟踪系统(EthoVision XT)自动记录仔鱼在每个阶段的运动距离、路径弯曲度和在孔中央停留的时间。评估幼鱼的运动能力和对光刺激的应激反应。

4. 慢性毒性实验（从胚胎到成鱼，150天）
暴露方式：胚胎阶段同急性实验。从12天后孵化开始，将幼鱼转移至更大的养殖缸中，并继续暴露于不同浓度的实验溶液（氯化铝和GACP的多个稀释浓度）中，直至150天（图1）。

生长监测：在鱼生长到60天、90天和150天时，测量所有鱼的体重和体长；

繁殖评估：从60天开始，每天收集每个暴露缸的鱼卵，统计产卵量、受精率，评估繁殖成功率。
同时，收集亲本鱼（F0代）在最高浓度组产下的受精卵（F1代），在清洁海水中培养至12天，观察其发育情况，评估跨代毒性；

成鱼行为学分析：在鱼生长到105天时，从阴性对照组和两个最高浓度组中挑选成鱼，进行一系列标准化的行为测试。所有行为测试均通过摄像机记录，并使用EthoVision XT进行自动分析，确保了数据的客观性和精确性；

群体行为测试：将6条鱼（3雄3雌）放入一个新水箱，记录其10分钟内的活动，分析每条鱼的运动距离和群体内个体间的平均距离，以评估群体的凝聚力；

探索能力测试（Z型迷宫）：将单条鱼放入一个Z型迷宫的安全区，2分钟后打开通道，记录其5分钟内的行为。分析指标包括：离开安全区的潜伏期、运动距离、进入远端区域的次数和时间等，以评估其探索欲和胆量；

自发活动测试：将单条鱼放入一个3L的观察缸中，适应10分钟后，记录其50分钟的自发运动轨迹，分析运动距离和路径弯曲度，评估其基础活动水平；

焦虑水平测试：将单条鱼放入一个狭长的新式水箱中，记录其5分钟内的垂直位置变化。分析其在上半区停留的时间和访问次数。

5. 化学分析与数据统计
在整个实验过程中，定期采集水样，分别通过0.45μm滤膜过滤（测溶解态铝）和不过滤（测总铝），并精确测定水样中的铝浓度。