- 对照组:注射等剂量的免疫球蛋白(IgG)
- 给药时间:孕期第5天(相当于人类孕中期)
- 剂量:低剂量(1 mg/kg)和高剂量(3 mg/kg)
- 给药方式:腹腔注射
此外,为了评估是否存在长期影响,研究还对部分未怀孕雌鼠先注射抗体,3周后再进行交配。
给药后3小时,采集母鼠血浆、胎盘及胚胎脑组织,检测以下细胞因子水平:
IL-1β、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α
研究同时进行行为学实验检测,旨在评估母鼠的养育行为、幼鼠的早期沟通能力,以及成年后代的社交、认知、情绪和感觉运动门控功能。实验使用诺达思的动物运动轨迹跟踪系统(EthoVision XT)和声音行为分析系统(UltraVox XT)等专业行为分析系统进行自动追踪和数据采集。
1. 母鼠行为测试:Pup Retrieval(幼鼠回巢实验)
- 时间:幼鼠出生后第4天(PD4)
- 方法:将3只幼鼠放在巢穴对侧,记录母鼠将所有幼鼠衔回巢穴所需时间
2. 幼鼠行为测试:Ultrasonic Vocalizations(超声波发声)
- 时间:PD4,在回巢实验之前
- 方法:每窝选取雌雄各两只幼鼠,单独置于隔音箱中,用USB超声波麦克风记录3分钟内的发声
- 分析指标:发声数量、平均时长、振幅
3. 成年后代行为测试
幼鼠断奶后按性别分笼饲养,8周龄起进行一系列行为学测试。
- Marble Burying(埋珠实验):评估重复刻板行为。小鼠放入铺有20颗黑色弹珠的笼中30分钟,记录埋藏弹珠数量。
- Social Interaction(社交互动实验):三箱社交装置,记录小鼠与陌生小鼠或物体的互动时间百分比。
- Open Field(旷场实验):评估自主活动和探索行为。小鼠在透明箱内自由活动,记录总移动距离。
- Light-Dark Box(明暗箱实验):评估焦虑样行为。记录小鼠在明亮区的移动距离百分比。
- Spontaneous Alternation(Y迷宫自发交替实验):评估工作记忆。小鼠自由探索Y迷宫5分钟,计算交替频率。
- Prepulse Inhibition(PPI,前脉冲抑制实验):评估感觉运动门控功能。使用声惊吓装置,在不同强度的前脉冲刺激下,记录对后续强声音惊吓反应的抑制百分比。
以上所有运动轨迹、互动时间、发声参数等数据,均使用诺达思的 EthoVision XT和UltraVox XT系统完成自动化、高通量、高精度的采集与分析。
结果
母鼠反应与妊娠结果
高剂量SaCoV-AB注射后30分钟,母鼠疾病行为评分略有升高,但120分钟内完全恢复,且不影响日常活动。妊娠结局无差异:各组母鼠的产仔数、幼鼠出生体重、PD4体重、性别比例均无显著差异。提前注射抗体的母鼠,后续妊娠结果同样正常。
免疫反应
高剂量SaCoV-AB仅引起母鼠血浆中TNF-α水平短暂升高。胎盘和胚胎脑中未检测到任何细胞因子水平变化,说明母体的炎症反应未传递至胎儿。
母性行为
各剂量组母鼠在幼鼠回巢实验中的回巢时间无显著差异(图1B),表明母性动机和行为能力未受影响。