蚂蚁的生存与社交主要依赖嗅觉,嗅觉感觉神经元(Olfactory Sensory Neuron,OSN)必须遵循“一个神经元一种受体”的规则,这是蚂蚁识别同伴、导航与归巢的核心保障。这要求每个嗅觉感觉神经元必须从数百个嗅觉受体(Olfactory receptor,Or)基因中精准表达单个基因。然而蚂蚁的Or基因多以串联阵列形式存在,其数量远超果蝇,且调控机制又独立于哺乳动物。因此如何实现这种高度专一的基因表达,长期以来都是困扰科研界的谜题。
纽约大学、佛罗里达大学等团队以哈氏滑胸蚁(Harpegnathos saltator)为研究对象,首次揭示了蚂蚁通过独特的转录干扰机制调控Or基因选择性表达的分子路径,相关内容于2025年10月发表于《Nature》,题为“Transcriptional interferences ensure one olfactory receptor per ant neuron”。研究团队联合多组学分析,阐明蚂蚁将"有缺陷的转录终止"转化为精密的调控工具,实现了"激活一个,沉默全部"的表达模式。
为破解蚂蚁Or基因的表达调控机制,研究团队应用多组学联合测序(Multiome Sequencing)技术,构建了从基因转录到染色质状态的完整研究体系:通过单细胞核RNA-seq(snRNA-seq)与单细胞核ATAC-seq(snATAC-seq)明确基因表达模式与染色质可及性;利用长读长RNA-seq(Iso-seq)解析转录本结构;借助CUT&RUN技术分析组蛋白修饰状态。
为确保测序数据的有效性和针对性,文中多次使用Blue Pippin全自动DNA脉冲场电泳回收仪对测序样本进行精准的DNA片段筛选回收,具体实验步骤:
1、5'-capped/5'-phosphorylated RNA 转录组测序文库的片段选择
5'转录组测序更侧重“研究基因的结构和调控机制”,适合探究转录起始、可变剪接、免疫组库这些更细致的问题,能提供更深入的基因调控信息。在 “5' 端 RNA 测序” 实验中,先通过 PCR 扩增获得目标片段,然后使用Blue Pippin 全自动DNA脉冲场电泳回收仪进行两次DNA片段分选(DNA size selection):
首次分选:从 PCR 扩增产物中进行DNA特定片段筛选:200–400 bp ,精准去除过短(如引物二聚体)或过长(如非特异性扩增产物)的杂质,确保文库片段符合NGS测序平台(NextSeq500/NovaSeq X Plus)的要求;
二次分选:对首次分选后的产物进行二次 PCR 扩增后,再次使用 Blue Pippin 筛选 250–450 bp 的片段,通过DNA片段大小筛选进一步优化文库片段长度分布,提升测序数据的准确性,避免因片段长度不均导致的测序偏差。
2、CUT&RUN DNA-蛋白质相互作用测序文库的片段选择
CUT&RUN(染色质免疫沉淀靶向切割与释放),即核酸酶靶向切割和释放,是一种使用靶标特异性一抗和Protein A - Protein G - 微球菌核酸酶 (pAG-MNase) 分离特异性蛋白-DNA 复合体的体内方法,在CUT&RUN实验中,文库构建完成后,使用 Blue Pippin全自动核酸切胶仪及2%预制胶试剂盒,筛选 185–600 bp DNA 片段:
保留与组蛋白结合的短片段染色质(组蛋白修饰相关的 DNA 片段通常较短),去除过长的基因组 DNA 杂质,更加精准的进行靶向DNA回收/获取,确保测序数据主要来源于目标染色质区域,提高后续分析(如组蛋白修饰信号富集)的特异性。
研究团队最终揭示了蚂蚁Or基因选择性表达的独特机制:
1. 转录通读现象:单个Or基因启动子被激活后,RNA聚合酶II因转录终止缺陷(而非多聚腺苷酸化缺陷),会持续转录下游所有基因,形成“阶梯式”共转录模式,但转录水平随距离增加逐渐降低。
2. 双向转录干扰:下游基因的转录本因无5'帽结构无法翻译,上游基因则被激活启动子驱动的长链反义转录本沉默,最终仅首个激活基因表达功能性蛋白。
3. 染色质状态特征:Or基因阵列整体富集抑制性组蛋白修饰H3K27me3,且无共享增强子,每个Or启动子自身包含完整调控元件。
这一机制既区别于哺乳动物的“随机选择+负反馈”,也不同于果蝇的“转录因子确定性调控”,是蚂蚁为适应Or基因串联扩张而独立进化的解决方案。
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https://doi.org/10.1038/s41586-025-09664-x
厂家介绍
Sage Science 公司位于美国马萨诸塞州,2010年成立,专注于核酸领域的样品制备,2万篇文献中应用,包括众多Nature、 Science、 Cell系列的文章,是DNA片段筛选回收领域的行业金标准。
Blue Pippin全自动DNA脉冲场电泳回收仪:
* 采用双通道电泳回收专利技术,全自动运行;
* 高精度回收、微量样品回收、高得率回收;
* 全自动完成DNA片段分选, 软件中自由选择需要筛选的片段范围;
* 免去了切胶纯化的繁琐步骤,比核酸片段筛选磁珠更加精准可控;
* 用于小片段DNA筛选回收,如小RNA/small RNA文库回收、cfDNA/ctDNA回收(循环血游离DNA/循环血肿瘤DNA);
* 用于大片段DNA(几kb、几十kb甚至几百kb)精准回收,如Pacbio HiFi文库构建、纳米孔测序建库、超长测序(Ultra Long Sequencing)文库构建等;
环亚生物科技(APG BIO)作为美国Sage Science公司DNA片段回收系列产品在中国区的独家代理商,为国内二代测序、三代测序用户提供测序样品前处理、质控的整体解决方案:组织研磨仪、单细胞悬液制备仪、细胞破碎仪、超声聚焦打断仪、全自动DNA片段分选回收仪、核酸片段分析仪、脉冲场电泳仪、全自动建库仪、荧光计、超微量分光光度计等。