CAR-T细胞治疗（Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy），即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，是一种有效治疗肿瘤的靶向疗法。该疗法采用基因工程技术，将来自人体的T细胞激活，装上定位导航装置CAR，将其改造为专门识别体内肿瘤细胞的靶向药物，通过免疫作用释放大量效应因子以杀灭肿瘤细胞，达到治疗恶性肿瘤的目的。CAR T细胞治疗对血液恶性肿瘤成效显著，但对实体瘤效果不佳，主要原因是CAR T细胞在实体瘤微环境中极易耗竭。
 
目前，对介导CAR T细胞功能丧失的机制知之甚少。来自宾夕法尼亚大学的Carl H. June、Regina M. Young和Shelley L. Berger等研究人员，对此进行了深入研究，并为改善CAR T细胞治疗实体瘤提供了新策略。相关成果以“An NK-like CAR T cell transition in CAR T cell dysfunction”为题，发表在顶级期刊《Cell》杂志上。  
研究者构建了一种体外模型模拟T细胞耗竭的特征。在该模型中，抗间皮素CAR（M5CAR）T细胞由于长期暴露于肿瘤抗原（CAE，continuous antigen exposure）而被驱动到功能失调，继而通过单细胞RNA测序(scRNA-seq)、ATAC测序、质谱、流式细胞术、细胞分选、细胞毒性测定等多种技术手段，研究CAE对CAR T细胞的功效、表面表达和表型的影响，确定了CAR T 细胞功能障碍的多种机制。研究发现CAR T细胞功能障碍与CAR T细胞向自然杀伤样（NK-like）CAR T细胞的转变有关。同时本研究还确定了一些CAR T细胞耗竭的关键调控因子，包括SOX4和ID3。通过基因编辑技术下调这些转录因子的表达，可以预防或延迟CAR T细胞功能障碍，从而提高CAR T细胞治疗实体瘤的疗效。
   
总之，文章构建的泛癌症功能障碍体外模型提供了一个深入的研究视角，不仅揭示了CAR T细胞在治疗实体瘤中的可塑性，还为改善CAR T细胞治疗提供了可能的解决方案，利用基因编辑下调ID3和SOX4表达，可能有助于提高CAR T细胞治疗实体瘤的效果。
 
本研究中，作者采用 Orflo Technologies 公司的 Moxi Flow 系列细胞计数与流式分析仪（升级后新型号为 Moxi V），在进行高通量细胞毒性测定之前，对经CAE后的CD8+ M5CAR T细胞进行细胞计数，并评估细胞活率。Moxi Flow系统提供了细胞数量和活性的重要数据，确保了实验中使用的T细胞具有高度活性和存活率，对于后续实验，包括评估CAR T细胞的细胞毒性和其他效应功能至关重要。

更多资讯请访问文献全文链接：https://doi.org/10.1016/j.cell.2021.11.016

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美国Orflo Technologies公司是一家专业的库尔特细胞计数分析仪器研发和制造企业，拥有多项专利技术，产品以库尔特高精细胞计数仪和库尔特流式细胞仪为主，产品功能覆盖：
 
* 细胞/细胞核高精度计数
* 细胞体积测量
* 无标记细胞健康评估
* PBMC 外周血单个核细胞分析
* 细胞荧光活率分析
* 单细胞测序文库质控
* CAR-T 细胞质控
* 常规流式细胞分析等