AAV感染肺部的方法有多种，较为常用的方法有鼻内滴注法、气管插管术、气管内注射，如果对肺部感染AAV的特异性要求较低，也可采用静脉注射、腹腔注射等方法，当进行肺癌成瘤实验时，也可采用瘤内注射的方式。下面对AAV感染肺部常用的三种方法进行介绍。

1、鼻内滴注法

鼻内滴注法是一种直接的AAV感染法，操作简单且对设备要求低，对新手实验员也同样适用。缺点是AAV颗粒容易沉积在上呼吸道（鼻道、鼻窦和咽）和胃肠道，如果需要有效地感染到下呼吸道，则可能需要更大剂量的AAV才能实现。

鼻内滴注AAV（两种操作手法）

操作步骤

1. 腹腔注射氯胺酮和甲苯噻嗪将小鼠麻醉；注意：为了保持小鼠稳定的呼吸频率，不应过度麻醉。
2. 甲按上图所示两种方法将小鼠控制好，防止其用嘴呼吸；
3. 乙缓慢滴一滴AAV悬液于小鼠鼻孔内壁，待液体被吸入后再滴下一滴，重复此操作至40μL AAV悬液全部滴完；
4. 使小鼠保持上述姿势约30~60s，以便AAV悬液充分进入下呼吸道；
5. 待小鼠在笼中恢复10min后，重复上述操作，再次给药40μL（每只小鼠共给药80μL）；
6. 将小鼠放回笼中直至完全清醒。

2、气管插管术

口腔气管插管术能够将病毒载体直接灌输入肺中，却没有外科手术的风险，并且避免了上呼吸道的病毒颗粒的损失。由于几乎所有AAV病毒颗粒都会到达肺内，所以要严格控制AAV的使用量。同时，与鼻内滴注法相比，口腔气管插管术需要一些特殊设备，操作起来也稍有难度。

气管插管术注射AAV

操作步骤

1. 腹腔注射氯胺酮和甲苯噻嗪将小鼠麻醉；注意：动物必须处于足够深的麻醉状态以防止运动或对载体的反应而打喷嚏或咳嗽；
2. 将小鼠放在垂直支架上，将门牙环置于小鼠上门牙上，让老鼠的腹部面向自己；
3. 轻轻地把小鼠舌头拉出来，并用拇指和食指按住，中指放在小鼠颈部和塑料支架之间；
4. 用食指、拇指在小鼠舌上牵引令其嘴张开，使插管路径伸直，并用中指在颈后调整头部角度；
5. 利用光纤作为光源和引导者，推动它通过可视声带（如果看不到声带，用中指作支撑，轻轻用力拉舌）；
6. 光纤插入后，同时将导管向前推进约5mm，然后勿移动导管，取出光纤；
7. 使小鼠平躺，用胶带将导管固定在小鼠嘴部防止其移动，另一端用橡皮泥支撑；
8. 用注射器通过导管输入80μL AAV；注意：在抽取80μL载体之前，吸取约100μL的空气至移液管尖，以防止载体的丢失，并促进载体深入肺部。
9. 等待5min，使AAV充分进入下呼吸道；
10. 把导管移出，将小鼠轻轻从工作台拿下，并将头部和胸部用折叠的纸巾小幅度垫高，以保证小鼠顺畅的呼吸；
11. 将小鼠放回笼中直至完全清醒。

3、气管内注射

与鼻内滴注相比，气管内注射能够提高AAV进入肺部的效率；与口腔气管插管法相比，设备更简单，操作更容易。然而，气管内注射具有极高的外科手术风险，包括出血、切口开裂、感染以及较长的恢复期等。不仅如此，由于小鼠气管窄小，很容易出现操作失误，将AAV注射到气管周围组织或食管中去。

气管内注射AAV

操作步骤

①腹腔注射氯胺酮和甲苯噻嗪将小鼠麻醉；

②将小鼠以背卧姿势固定在啮齿动物工作台上，并将其前爪伸直固定；

③剃除颈部部分区域的鼠毛，并用碘伏做消毒处理；

④用手术剪刀在颈部做一个5~7mm的小切口；

⑤手握镊子固定住小鼠气管，另一只手握住注射器，使注射器针头斜面朝上，与气管成45°。

注意：一旦针头插入，轻轻地将针头向外移动，远离小鼠身体，确定针头是否正确地插入气管。

⑥将40~80μL 的AAV缓慢注入气管，等待5s后慢慢取出针管；

⑦缝合伤口，将小鼠放回笼中恢复，直到完全清醒。

三种AAV肺部给药途径的比较：

总结：AAV载体给药方式应根据研究人员的目标位点和技能进行选择。