在生命科学与生物医药研究中，精准解析细胞与组织内生物分子的分布、表达及相互作用，是攻克疾病、推动新药研发的关键。免疫荧光（IF）与多重免疫组化（mIHC）凭借高特异性、高灵敏度，成为科研人探索微观世界的“精准导航”。明美光电深耕领域20余年，打造全场景解决方案，为科研与临床转化注入强劲动力。

免疫荧光IF 微观世界的“精准荧光探针”
核心原理：抗原抗体特异性结合+荧光信号放大
利用抗原与抗体特异性结合，通过荧光基团标记实现目标分子可视化，核心分为两步：

• 抗原-抗体结合：一抗精准识别目标抗原（如细胞内特定蛋白），确保检测特异性；
• 荧光信号放大：荧光素标记二抗结合一抗，形成复合物，通过荧光发光放大并呈现信号。

两大检测方式：直接法vs间接法

一抗二抗选择核心原则：

• 一抗：选针对目标抗原的特异性抗体，避免交叉反应；
• 二抗：种属需与一抗不同（如小鼠一抗适配兔/山羊 二抗）；
• 多重标记：一抗需来自不同物种，二抗荧光素波长相差50-60nm以上，避免信号干扰。

应用场景：覆盖科研与临床全领域

• 基础科研：定位蛋白亚细胞分布，分析共定位与相互作用，揭示细胞生命活动机制；
• 临床诊断：检测病原体、筛查自身免疫病抗体、定位肿瘤标志物，助力早期诊断与分型；
• 药物研发：筛选作用靶点、评估药效对蛋白表达的影响，加速新药落地。

多重免疫组化mIHC 突破单标局限，解析复杂组织微环境
技术核心：TSA放大+循环染色，实现多靶标同步检测
mIHC是IF的进阶形态，依托酪胺信号放大（TSA）技术与循环染色，突破传统单靶标局限：

核心原理：抗原与一抗结合后，HRP耦联二抗结合一抗；H2O2激活荧光酪胺，使其与抗原共价结合放大信号；洗脱抗体后重复流程，实现同一张切片多靶标检测。

技术流程：
1：石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯15min→无水乙醇Ⅰ5min95%→85%→75% 乙醇各 5 min，取出放在通风橱内，酒精晾干后放入自来水中冲洗，蒸馏水洗。

2：抗原修复（关键）：·常用：pH6.0 柠檬酸盐或pH9.0 EDTA-Tris。水浴：95℃ 25–30 min；自然冷却至室温（勿骤冷，切勿干片）。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。(修复液和修复条件根据组织类型以及抗原类型来确定）。

3：阻断内源性过氧化物酶：切片放入3%H₂O₂ ，室温避光孵育15 min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

4：BSA封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加用3%BSA-PBS（或者10% 正常血清）均匀覆盖组织，室温封闭30min。

5：加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加用抗体稀释液稀释好的的一抗，切片平放于避光湿盒内4°C孵育过夜或者37度1-2h。（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）

6：加HRP二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的HRP二抗覆盖组织，避光室温孵育50min，PBS洗三次。

7：荧光染料反应：TYRXXX荧光染料反应 2min-15min，PBS洗三次。

8：重复2-7步骤
注：
不同靶标的一抗；
对应种属HRP 二抗；
不同光谱的TSA 荧光染料；
（如 488/555/594/647）
染色顺序建议：低丰度→高丰度，减少信号干扰；

9：DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3×5min。切片圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。

10：封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

应用价值：赋能精准医疗与新药研发
肿瘤研究：解析肿瘤微环境免疫细胞浸润，揭示免疫逃逸机制，助力靶点筛选；
药效评估：量化用药前后靶标变化，动态优化治疗方案；
伴随诊断：多靶标联合分析，提升诊断准确性，支撑个性化治疗。

明美显微成像方案 全链路适配IF与mIHC实验需求
作为国家级专精特新“小巨人”企业，明美光电深耕显微成像20余年，打造硬件+软件全链路解决方案，覆盖从样本染色到成像检测的每一步。

核心设备矩阵
全流程服务支撑

• 技术适配：完美匹配IF与mIHC需求；
• 专业服务：提供安装、调试、培训一站式支持；
• 方案定制：根据科研场景、样本类型，量身打造专属成像方案。