胰腺是重要的分泌器官，由外分泌组织(腺泡)、内分泌组织(胰岛)、胰管和血管组成，这些结构的功能障碍会导致不同的胰腺疾病发生。鉴于胰腺的解剖位置和复杂结构，胰腺疾病的基因治疗需要针对不同胰腺部位进行有效的基因传递。多项研究表明，相比腺病毒和慢病毒而言，腺相关病毒更能有效转导胰腺，已作为一种明星载体在胰腺研究中展开应用。今天小V就带大家一起学习一下rAAV在胰腺基因工程中的选择策略。

一、血清型的选择
研究表明AAV8在胰腺中具有相对较高的转导效率。
Cheng H等研究证明，AAV8对胰腺的转导效率优于AAV1、AAV2、AAV5血清型，且持续表达时间较长；进一步通过胰腺导管给药观察不同血清型的组织分布发现AAV8可以高效转导胰腺组织，并且转导效率呈剂量依赖式增加。

· 维真AAV8感染小鼠胰腺效果图 ·

（Insulin：红色荧光 GFP：绿色荧光）病毒产品：AAV8-insulin-GFP病毒用量：10^12 vg

二、AAV载体的选择
研究表明scAAV对胰腺的转导效率也较高，且不同血清型转导效率与给药方式、启动子和注射量等密切相关。体外感染分离的胰岛时，scAAV6的感染能力强于scAAV1、scAAV2和scAAV8；通过全身给药时（腹腔体内注射），scAAV8比scAAV6转导效率强；而通过胰腺导管给药时，scAAV6强于scAAV8、9，可以有效转导腺泡、导管、胰岛在内的多种胰腺细胞。

三、启动子的选择
为了在胰腺特定细胞中实现AAV介导的转基因表达，可以选择胰腺组织特异性启动子，目前文献中推荐的启动子是胰腺β细胞特异性启动子Insulin和PDX1，可以有效介导基因在胰腺β细胞的特异表达。

四、注射方式的选择
在胰腺研究中，常用的给药方有腹腔注射、静脉注射和胰腺导管内注射。不同给药方式会影响AAV载体对细胞的转导能力。研究表明，与导管内给药相比，ssAAV8和ssAAV9载体对胰腺的系统性给药会导致其转导率降低.（参考文献“Safety and Efficacy of AAV Retrograde Pancreatic D)

因此，根据实验目的选择合适的注射方式十分重要。系统性给药方式（腹腔注射和静脉注射）的操作方式不再赘述，在此介绍一下胰腺导管内注射的操作方式（仅供参考）:
1、将小鼠进行麻醉后手术打开其腹腔，在胆囊底部切一小口，将特定的导管插入胆囊管中；
2、将导管置入总胆管，并在胆管和导管周围用微钳夹固定，以防止载体反流进入肝脏；
3、将微钳夹置于Oddi括约肌上，避免载体漏入十二指肠，将100μl AAV载体通过导管缓慢注入胰管，腺体均匀肿胀则证明给药成功；
4、灌注5min后取下上述两个微钳夹；
5、取出导管，手术缝合小鼠腹腔伤口。
6、术后，将小鼠放置在加热垫上待其恢复后放回笼子。

· 总结 ·
在胰腺研究中，不同AAV血清型转导效率与AAV载体选择、启动子以及给药方式等因素密切相关：
①通过胰腺导管给药方式，ssAAV8比ssAAV1、ssAAV2、ssAAV5转导效率强；
②通过全身给药，scAAV8比scAAV6转导效率强；通过胰腺导管给药方式时，scAAV6强于scAAV8、9；
③ssAAV8、9经胰腺导管给药比经全身给药转导效率强。

小V建议您实验前根据实验目的综合选择合适的载体、血清型、启动子和注射方式，以实现基因的高效长久表达。