ADP小鼠脂联素酶联免疫试剂盒使用说明书
2026-05-22 来源:本站 点击次数:24
使用ADP小鼠脂联素酶联免疫试剂盒需要按照「前期准备→样本处理→实验操作→结果计算」的规范流程完成，以下是详细操作步骤：
一、实验前准备
试剂盒存储与平衡：收到试剂盒后，校准品、检测试剂A/B、96孔板需存储于-20℃，其余试剂存储于4℃；开封未使用的板条需密封干燥保存，按要求存储的试剂盒开封后可稳定1个月。实验前需将所有试剂平衡至室温，浓缩洗涤液若有结晶，可水浴加温助溶后混匀。
自备器材：提前准备酶标仪、微量加液器、EP管、蒸馏水/去离子水、滤纸等器材，酶标仪建议提前预热。
二、标准操作流程
目前主流试剂盒采用双抗体夹心法，操作步骤如下：
标准品配制：临用前15分钟内倍比稀释标准品，禁止直接在孔内稀释，现配现用，配制好的标准品仅可使用1次，一般会配制出5-7个浓度梯度用于绘制标准曲线。
加样温育：设置空白孔、标准孔、待测样品孔，按照说明书要求加入对应体积的样品/标准品，覆膜后37℃温育，不同品牌温育时间存在差异，常见为80-120分钟。
洗涤加检测试剂：弃液后洗板，加入生物素化抗体工作液，37℃温育后再次洗涤，接着加入辣根过氧化物酶标记的亲和素工作液再次温育洗涤，洗涤次数根据试剂盒要求一般为3-5次。
显色终止：依次加入TMB底物溶液，37℃避光显色15-30分钟，加入硫酸终止液终止反应，此时蓝色会转变为黄色。
读数计算：终止后立即（15分钟内）用酶标仪在450nm波长下读取各孔吸光度（OD值），推荐使用专业软件Curve Expert拟合四参数逻辑（4-PL）标准曲线，计算样本浓度；若样本提前稀释，最终结果需要乘以总稀释倍数。
三、注意事项
为保证结果准确性，每次实验需重新配制标准品，同时建议做复孔重复测定；
加样尽量控制在5分钟内完成，多样本推荐使用排枪加样，避免加样时间差影响结果；
不同批次试剂盒组分不可混用，封板膜为一次性使用，避免交叉污染。
一、实验前准备
试剂盒存储与平衡：收到试剂盒后，校准品、检测试剂A/B、96孔板需存储于-20℃，其余试剂存储于4℃；开封未使用的板条需密封干燥保存，按要求存储的试剂盒开封后可稳定1个月。实验前需将所有试剂平衡至室温，浓缩洗涤液若有结晶，可水浴加温助溶后混匀。
自备器材：提前准备酶标仪、微量加液器、EP管、蒸馏水/去离子水、滤纸等器材，酶标仪建议提前预热。
二、标准操作流程
目前主流试剂盒采用双抗体夹心法，操作步骤如下：
标准品配制：临用前15分钟内倍比稀释标准品，禁止直接在孔内稀释，现配现用，配制好的标准品仅可使用1次，一般会配制出5-7个浓度梯度用于绘制标准曲线。
加样温育：设置空白孔、标准孔、待测样品孔，按照说明书要求加入对应体积的样品/标准品，覆膜后37℃温育，不同品牌温育时间存在差异，常见为80-120分钟。
洗涤加检测试剂：弃液后洗板，加入生物素化抗体工作液，37℃温育后再次洗涤，接着加入辣根过氧化物酶标记的亲和素工作液再次温育洗涤，洗涤次数根据试剂盒要求一般为3-5次。
显色终止：依次加入TMB底物溶液，37℃避光显色15-30分钟，加入硫酸终止液终止反应，此时蓝色会转变为黄色。
读数计算：终止后立即（15分钟内）用酶标仪在450nm波长下读取各孔吸光度（OD值），推荐使用专业软件Curve Expert拟合四参数逻辑（4-PL）标准曲线，计算样本浓度；若样本提前稀释，最终结果需要乘以总稀释倍数。
三、注意事项
为保证结果准确性，每次实验需重新配制标准品，同时建议做复孔重复测定；
加样尽量控制在5分钟内完成，多样本推荐使用排枪加样，避免加样时间差影响结果；
不同批次试剂盒组分不可混用，封板膜为一次性使用，避免交叉污染。
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