该研究论文 2024 年 2 月见刊于《Cell Reports》（IF≈9.998），由中国农业大学动物生物育种国家重点、北京脑科学与类脑研究中心主导完成，论文题目：Schwann cell promotes macrophage recruitment through IL-17B/IL-17RB pathway in injured peripheral nerves。研究依托国家自然科学基金、中农大青年人才项目等课题资助，聚焦周围神经损伤后施万细胞调控巨噬细胞招募的全新分子通路。

 

 

本研究以 MLKL⁻/⁻、Sarm1⁻/⁻两种髓鞘清除缺陷基因敲除小鼠 + 野生型 C57BL/6 小鼠为动物模型，通过体内基因敲除、体外原代细胞培养、高通量测序、Luminex 多因子筛选等多维度实验，锁定 IL-17B/IL-17RB 自分泌信号轴是周围神经损伤后施万细胞驱动巨噬细胞募集的关键通路：损伤后施万细胞自分泌 IL-17B，结合自身膜受体 IL-17RB，上调 CCL2、CCL3 等多种趋化因子分泌，进而诱导循环单核浸润至损伤神经、清除髓鞘碎片并促进轴突再生；而中枢视神经损伤时内源 IL-17B 表达不升高，但玻璃体过表达 IL-17 仍可招募巨噬细胞、提升视网膜神经节细胞存活率，为脱髓鞘病、中枢神经再生提供全新靶点。

 

（一）结果 1：MLKL、Sarm1 缺失抑制损伤坐骨神经巨噬细胞浸润 结论：两种基因缺陷小鼠损伤远端神经巨噬细胞数量显著下降，巨噬细胞增殖无变化（Ki67 染色排除增殖影响），提示髓鞘降解异常间接阻碍巨噬细胞趋化信号释放，是后续筛选趋化上游关键因子的实验切入点。 （二）结果 2：转录组筛选锁定 IL-17B 为关键调控基因 结论：神经损伤依赖 MLKL/Sarm1 介导的髓鞘分解，诱导施万细胞高表达 IL-17B，IL-17B 是调控趋化因子分泌的核心上游分子。 （三）结果 3：IL-17B 特异性在施万细胞表达，通过 IL-17RB 自分泌激活 细胞定位：损伤后 IL-17B 仅在 SOX10 阳性施万细胞表达，神经中 IL-17RA 几乎不表达，IL-17RB 与 MB（髓鞘蛋白，施万标志物）共定位； 互作：体内损伤神经中 IL-17B 仅结合 IL-17RB，形成自分泌环路； 功能：Il17b⁻/⁻、Il17rb⁻/⁻小鼠、施万特异性敲除小鼠巨噬浸润大幅下降；AAV-MBP 驱动施万细胞过表达 IL-17B 可挽救 Mlkl⁻/⁻小鼠巨噬招募缺陷。 结论：施万细胞 IL-17B 以自分泌方式结合自身 IL-17RB，是巨噬浸润必不可少的信号。 （四）结果 4：IL-17B/IL-17RB 上调多重趋化因子（Luminex 核心实验） 结论：IL-17B 依赖 IL-17RB 上调 CCL2、CCL3、CCL7、CCL19、CCL22、G-CSF 等多种巨噬趋化因子，其中 CCL2/CCL3 是下游直接效应分子，外源补充可逆转 Il17b⁻/⁻巨噬募集不足。

（五）结果 5：IL-17B 缺失阻碍髓鞘清除与轴突再生、损伤后功能恢复变慢 结论：Il17b/Il17rb 敲除不影响 MLKL 介导的施万细胞初始髓鞘破碎，但巨噬缺失致髓碎片清除受阻，轴突再生延迟，小鼠运动、感觉功能修复显著变慢，证实通路通过巨噬调控神经修复全过程。 （六）结果 6：眼内补充 IL-17B 可促进中枢视神经修复 结论：小鼠视神经损伤后内源 IL-17B 无上调，但外源 IL-17B 可诱导视网膜巨噬浸润、提升 RGC 存活、促进中枢轴突再生，提示 IL-17B 是中枢神经再生潜在药物靶点。

 

（1）文献 Luminex 实验完整操作流程

①阴性 siRNA+PBS 对照组；

②阴性 siRNA+rIL-17B（200ng/mL）；

③IL-17RB-siRNA+PBS；

④IL-17RB-siRNA+rIL-17B；

siRNA 提前转染 72h，重组 IL-17B 处理 24h 后收集细胞上清，3000g 离心 5min 去除细胞残渣，上清 - 80℃分装冻存，检测前 1:2 试剂盒稀释液稀释； 上机检测：使用 Luminex 200 仪器，按照标准流程加微球、捕获一抗、荧光二抗孵育，仪器读取荧光信号，基于标准曲线定量各因子浓度； 数据验证：Luminex 筛选结果后，作者使用 qPCR 在小鼠体内损伤坐骨神经组织对 CCL2、CCL3 等关键因子 mRNA 水平二次验证（图 5C），蛋白 + 基因双重佐证通路下游趋化变化。 检测靶点：31 种 CC/CXC/CX3C 趋化因子 + 23 种免疫相关细胞因子（CCL2、CCL3、CCL7、CCL22、G-CSF、TNF-α、IFN-γ、IL 系列等），对应图 5A 热图、5B 定量柱状图。 （2）实验所用 2 款货号

货号	产品名	检测指标
LXLBM23-1	小鼠细胞因子-23因子检测服务	G-CSF,GM-CSF,IFN-γ,IL-10,IL-13,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,TNF-α,IL-9,IL-3,Eotaxin/CCL11,IL-12(p40),IL-12(p70),IL-17A,IL-1α,IL-1β,GRO-α (Gro-a/KC/CXCL1),MCP-1/CCL2,MIP-1α/CCL3,MIP-1β,RANTES
LXLBM31-1	小鼠趋化因子-31因子检测服务	BCA-1/CXCL13,CTACK/CCL27,ENA-78/CXCL5,Eotaxin/CCL11,Eotaxin-2/CCL24,Fractalkine/CX3CL1,GM-CSF,I-309/CCL1,IFN-γ,IL-1β,IL-2,IL-4,IL-6,IL-10,IL-16,IP-10/CXCL10,I-TAC/CXCL11,KC/CXCL1,MCP-1/CCL2,MCP-3/CCL7,MCP-5/CCL12,MDC/CCL22,MIP-1α/CCL3,MIP-1β/CCL4,MIP-3α/CCL20,MIP-3β/CCL19,RANTES/CCL5,SCYB16/CXCL16,SDF-1α/CXCL12,TARC/CCL17,TNF-α

  

神经免疫细胞因子检测找乐备实（LabEx），乐备实依托 Luminex、MSD、CBA 等多平台，可承接外周 / 中枢神经组织、脑脊液、原代施万细胞 / 巨噬细胞上清的多因子高通量检测，覆盖 IL-17 家族、CC 类趋化因子、TNF、IFN 等神经免疫标志物，配套样本保存、前处理、上机检测、原始数据及统计分析全链条科研服务，适配周围神经损伤、脱髓鞘疾病、视神经损伤等各类神经免疫课题样本检测需求。

  
乐备实（上海优宁维生物科技股份有限公司旗下全资子公司），是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、PLA蛋白互作、多色免疫组化、DSP空间多组学等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。