人甲状腺滤泡上皮细胞实验操作步骤详解
2026-06-18 来源:本站 点击次数:29
结合此前你关注的人甲状腺滤泡上皮细胞相关产品信息，以下是完整的实验操作步骤：
一、基质胶包被准备
全程将基质胶、移液枪头、移液管置于4℃预冷，冰上解冻基质胶。
用预冷的DMEM/F12稀释基质胶，向6孔板每孔加入1mL包被液，37℃孵育20min凝固，使用前用DMEM/F12清洗1次，多余包被板4℃可保存10天。
二、细胞复苏接种
提前配制含10μM ROCK抑制剂的mTeSR培养基，预热后加入包被好的孔板中。
37℃快速解冻细胞冻存管，75%酒精消毒后转移至生物安全柜，将细胞悬液逐滴加入含5mL培养基的离心管中，200rcf离心5min。
弃上清，用含ROCK抑制剂的培养基重悬细胞沉淀，转移至6孔板，放入37℃、5%CO₂培养箱培养，每24h更换一次培养基。
三、常规传代操作
待细胞融合度达80%时，弃去旧培养基，用PBS清洗细胞1次。
加入1mL 0.25%胰蛋白酶，镜下观察细胞回缩变圆后，加入完全培养基终止消化，吹打收集细胞悬液，1000rpm离心5min。
弃上清，用新鲜完全培养基重悬沉淀，按1:2比例分瓶，放入培养箱继续培养。
四、细胞冻存操作
细胞融合度达80%时，按传代步骤完成消化离心，用FBS:DMSO=9:1的冻存液重悬细胞，转移至冻存管。
先将冻存管置于-20℃放置1.5h，再转移至-80℃过夜，24h后转入液氮中长期保存，使用程序降温盒可直接放入-80℃。
五、功能实验操作
1.聚碘检测：通过基底膜钠-碘同向转运体，检测细胞主动摄取碘离子的能力。
2.激素合成验证：检测细胞内甲状腺球蛋白合成、碘化酪氨酸偶联过程，最终测定上清中T3、T4的分泌水平。
一、基质胶包被准备
全程将基质胶、移液枪头、移液管置于4℃预冷，冰上解冻基质胶。
用预冷的DMEM/F12稀释基质胶，向6孔板每孔加入1mL包被液，37℃孵育20min凝固，使用前用DMEM/F12清洗1次，多余包被板4℃可保存10天。
二、细胞复苏接种
提前配制含10μM ROCK抑制剂的mTeSR培养基，预热后加入包被好的孔板中。
37℃快速解冻细胞冻存管，75%酒精消毒后转移至生物安全柜，将细胞悬液逐滴加入含5mL培养基的离心管中，200rcf离心5min。
弃上清，用含ROCK抑制剂的培养基重悬细胞沉淀，转移至6孔板，放入37℃、5%CO₂培养箱培养，每24h更换一次培养基。
三、常规传代操作
待细胞融合度达80%时，弃去旧培养基，用PBS清洗细胞1次。
加入1mL 0.25%胰蛋白酶，镜下观察细胞回缩变圆后，加入完全培养基终止消化，吹打收集细胞悬液，1000rpm离心5min。
弃上清，用新鲜完全培养基重悬沉淀，按1:2比例分瓶，放入培养箱继续培养。
四、细胞冻存操作
细胞融合度达80%时，按传代步骤完成消化离心，用FBS:DMSO=9:1的冻存液重悬细胞，转移至冻存管。
先将冻存管置于-20℃放置1.5h，再转移至-80℃过夜，24h后转入液氮中长期保存，使用程序降温盒可直接放入-80℃。
五、功能实验操作
1.聚碘检测：通过基底膜钠-碘同向转运体，检测细胞主动摄取碘离子的能力。
2.激素合成验证：检测细胞内甲状腺球蛋白合成、碘化酪氨酸偶联过程，最终测定上清中T3、T4的分泌水平。
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