人甲状腺滤泡上皮细胞分离标准方法
2026-06-18 来源:本站 点击次数:33
结合此前你了解的人甲状腺滤泡上皮细胞培养条件相关背景，以下是该细胞的标准分离方法：
一、前期准备
提前配制含10%胎牛血清、双抗的完全培养基，37℃预热；准备无菌手术器械、离心管、胰蛋白酶-胶原酶混合消化液、PBS缓冲液，全部放入无菌操作台紫外消毒。
二、组织处理
无菌环境下取出新鲜甲状腺组织，用预冷PBS反复冲洗去除血污，剪至1mm³左右的细小组织块。
三、酶解消化
加入胰蛋白酶-胶原酶混合消化液，37℃水浴消化15-20分钟，期间每隔5分钟轻轻摇晃一次，促进组织充分解离。
四、终止与过滤
消化结束后立即加入等体积完全培养基终止消化，用200目无菌筛网过滤，去除未消化的组织残渣，收集细胞悬液。
五、纯化与接种
将细胞悬液以1000rpm离心5-8分钟，弃上清后用完全培养基重悬沉淀，结合差速贴壁法去除成纤维细胞，将纯化后的细胞接种到提前用鼠尾胶原Ⅰ包被的培养瓶中，放入37℃、5%CO₂培养箱培养即可。
一、前期准备
提前配制含10%胎牛血清、双抗的完全培养基，37℃预热；准备无菌手术器械、离心管、胰蛋白酶-胶原酶混合消化液、PBS缓冲液，全部放入无菌操作台紫外消毒。
二、组织处理
无菌环境下取出新鲜甲状腺组织，用预冷PBS反复冲洗去除血污，剪至1mm³左右的细小组织块。
三、酶解消化
加入胰蛋白酶-胶原酶混合消化液，37℃水浴消化15-20分钟，期间每隔5分钟轻轻摇晃一次，促进组织充分解离。
四、终止与过滤
消化结束后立即加入等体积完全培养基终止消化，用200目无菌筛网过滤，去除未消化的组织残渣，收集细胞悬液。
五、纯化与接种
将细胞悬液以1000rpm离心5-8分钟，弃上清后用完全培养基重悬沉淀，结合差速贴壁法去除成纤维细胞，将纯化后的细胞接种到提前用鼠尾胶原Ⅰ包被的培养瓶中，放入37℃、5%CO₂培养箱培养即可。
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