SIRPB1通过SYK调控胶质瘤免疫微环境的机制与临床价值
2026-06-26 来源:本站 点击次数:53一、文章基本信息
题为《SIRPB1 regulates inflammatory factor expression in the glioma microenvironment via SYK: functional and bioinformatics insights》，发表于转化医学领域期刊《Journal of Translational Medicine》。研究由吉林大学第一医院神经外科团队，整合了公共数据库生物信息学分析、单细胞测序、CRISPR 基因编辑、细胞共培养及分子生物学实验，系统阐释了 SIRPB1 在胶质瘤免疫微环境中的调控机制与临床价值。
研究数据涵盖 TCGA 数据库 670 例胶质瘤样本、GTEx 数据库 1152 例正常脑组织样本，并结合临床组织样本与体外细胞模型开展多维度验证，为胶质瘤免疫治疗靶点开发提供了新的依据。
二、研究核心思路与主旨
胶质瘤是中枢神经系统恶性程度最高的肿瘤之一，其复杂的免疫抑制微环境是肿瘤进展、免疫逃逸及治疗耐药的核心原因，其中肿瘤相关巨噬细胞（TAM）占非肿瘤细胞的绝大多数，是微环境调控的关键细胞类群。
信号调节蛋白 β1（SIRPB1）是免疫球蛋白超家族成员，主要表达于髓系细胞表面，既往研究提示其参与肿瘤进展，但在胶质瘤免疫微环境中的具体功能与分子机制尚不明确。
本研究的核心思路为：
1、基于大样本公共数据库，明确 SIRPB1 在胶质瘤中的表达特征、临床相关性及预后价值；
2、通过单细胞测序与免疫浸润分析，定位 SIRPB1 的表达细胞类群，解析其与免疫微环境的关联；
3、构建 SIRPB1 基因敲除细胞模型，结合胶质瘤 - 巨噬细胞共培养体系，验证 SIRPB1 对炎症因子分泌的调控作用；
4、深入揭示 SIRPB1 通过 DAP12-SYK 轴激活下游钙信号、MAPK、NF-κB 通路的分子机制；
5、构建整合 SIRPB1 与临床特征的预后模型，验证其临床转化价值。
1、基于大样本公共数据库，明确 SIRPB1 在胶质瘤中的表达特征、临床相关性及预后价值；
2、通过单细胞测序与免疫浸润分析，定位 SIRPB1 的表达细胞类群，解析其与免疫微环境的关联；
3、构建 SIRPB1 基因敲除细胞模型，结合胶质瘤 - 巨噬细胞共培养体系，验证 SIRPB1 对炎症因子分泌的调控作用；
4、深入揭示 SIRPB1 通过 DAP12-SYK 轴激活下游钙信号、MAPK、NF-κB 通路的分子机制；
5、构建整合 SIRPB1 与临床特征的预后模型，验证其临床转化价值。
研究最终提出：SIRPB1 是胶质瘤巨噬细胞功能的关键调控分子，可通过重塑免疫微环境促进肿瘤进展，是兼具预后评估与靶向治疗潜力的新型生物标志物。
三、主要研究结果
1、SIRPB1 在胶质瘤中高表达，是不良预后的独立危险因素
- 表达特征：泛癌分析显示 SIRPB1 在胶质瘤（GBM+LGG）中显著上调；临床组织样本验证表明，胶质瘤组织 SIRPB1 蛋白与 mRNA 水平均远高于癌旁正常组织，且表达量随 WHO 病理分级升高而递增。
- 预后价值：Kaplan-Meier 分析显示，SIRPB1 高表达患者的总生存期（OS）与无进展间期（PFI）显著缩短；亚组分析提示，其预后价值在低级别胶质瘤（LGG）、IDH 野生型、1p/19q 非共缺失亚群中更为突出。
- 临床关联：SIRPB1 表达与 WHO 分级、IDH 突变状态、1p/19q 共缺失状态、初始治疗应答等核心临床病理特征显著相关，高表达对应更强的肿瘤恶性表型。
- 预后模型：研究整合 SIRPB1 表达与 WHO 分级、IDH 状态、年龄等临床变量，构建了列线图预后预测模型，总生存期预测的 C-index 达 0.831，校准曲线显示预测值与实际生存率高度吻合。
2、SIRPB1 主要定位于髓系细胞，与巨噬细胞浸润高度相关
通过单细胞测序数据、多色免疫荧光与细胞系表达验证，研究明确了 SIRPB1 的细胞分布特征：
- SIRPB1 主要表达于胶质瘤微环境中的巨噬细胞、小胶质细胞与单核细胞，肿瘤细胞本身表达水平极低；
- SIRPB1 与 M1 型标志物 CD86、M2 型标志物 CD163 及小胶质细胞标志物 TMEM119 均存在共定位，提示其在肿瘤相关巨噬细胞中广泛表达；
- 免疫浸润分析显示，SIRPB1 表达量与巨噬细胞浸润程度呈显著正相关（cor=0.574），同时与中性粒细胞、活化树突状细胞浸润正相关，与抗肿瘤免疫相关的 T 细胞亚群负相关。
3、SIRPB1 调控炎症因子分泌，但不影响巨噬细胞经典极化
研究利用 CRISPR/Cas9 技术构建了 SIRPB1 稳定敲除的 THP-1 单核细胞系，诱导为巨噬细胞后进行极化实验：
- SIRPB1 敲除不影响 M0/M1/M2 巨噬细胞表面标志物（CD11b、CD86、CD206）的表达，也不改变 STAT1、STAT6 的磷酸化水平，说明其不参与巨噬细胞经典极化通路的调控；
- 功能层面，SIRPB1 缺失可显著下调 M1 极化状态下 IL-8、CCL2 的转录，以及 M2 极化状态下 IL1RA 的转录，提示其选择性调控部分炎症与趋化因子的表达。
4、SIRPB1 通过 DAP12-SYK 信号轴重塑胶质瘤免疫微环境
借助共培养体系与分子实验，研究阐明了完整的信号调控通路：
- SIRPB1 通过衔接蛋白 DAP12 与脾酪氨酸激酶 SYK 结合，介导 SYK 磷酸化激活；
- 激活的 SYK 进一步启动钙信号、MAPK（ERK）与 NF-κB 通路，促进 CCL2、IL-8、IL1RA 等因子的转录与分泌；
- 回复实验证实，异位表达 SIRPB1 可恢复上述炎症因子的水平；而使用 SYK 特异性抑制剂 GS9973 可阻断该效应，明确了 SYK 在通路中的核心地位；
- 胶质瘤细胞与巨噬细胞共培养时，SIRPB1 缺失会导致 SYK 磷酸化水平下降，炎症因子分泌整体减少，直接证实 SIRPB1 参与了肿瘤 - 免疫细胞的互作调控。
四、Luminex 多因子检测技术的关键支撑作用
在本研究中，Luminex 液相芯片技术是连接基因型（SIRPB1 敲除）与表型（分泌组变化）的核心实验工具，为机制验证提供了蛋白水平的直接证据。
1、实验设计与操作流程
研究采用 Transwell 非接触共培养体系模拟体内胶质瘤微环境：
（1）上层小室接种 U87MG 胶质瘤细胞，下层接种经 PMA 诱导分化的 THP-1 巨噬细胞（分为 SIRPB1 野生型 WT 与敲除 KO 两组）；
（2）共培养 48 小时后，分别收集上下层培养上清，经 0.45μm 滤膜去除细胞碎片后于 - 80℃冻存；
（3）样本交由专业平台采用 Luminex 技术进行多细胞因子定量检测，最终数据按每百万 THP-1 巨噬细胞进行标准化校正，消除细胞数量差异带来的偏差。
（1）上层小室接种 U87MG 胶质瘤细胞，下层接种经 PMA 诱导分化的 THP-1 巨噬细胞（分为 SIRPB1 野生型 WT 与敲除 KO 两组）；
（2）共培养 48 小时后，分别收集上下层培养上清，经 0.45μm 滤膜去除细胞碎片后于 - 80℃冻存；
（3）样本交由专业平台采用 Luminex 技术进行多细胞因子定量检测，最终数据按每百万 THP-1 巨噬细胞进行标准化校正，消除细胞数量差异带来的偏差。
2、核心验证目标
Luminex 检测主要回答两个关键科学问题：
- 全局分泌谱变化：SIRPB1 敲除后，巨噬细胞在与胶质瘤细胞互作过程中，分泌的炎症因子、趋化因子谱发生了怎样的改变；
- 细胞互作的双向效应：区分肿瘤细胞层与巨噬细胞层的因子分泌差异，解析两种细胞之间的分泌调控网络。
3、检测的核心指标
本研究通过 Luminex 技术实现了多因子并行检测，覆盖免疫调控、趋化、血管生成等多个维度，核心指标包括：
- 免疫调节因子：IL-6、TNF-α、IL1RA、G-CSF
- 趋化因子：CCL2、CCL5、CXCL8（IL-8）、CXCL10
- 血管生成因子：VEGF、PDGF-BB
4、技术价值与关键发现
- 多维度锁定效应分子：Luminex 的高通量特性避免了单一指标检测的局限性，研究同时观察到多种因子的协同变化，最终锚定 IL-8、CCL2、IL1RA 为 SIRPB1 调控的核心效应分子，与转录组结果形成相互印证。
- 高灵敏度保障检出：该技术的宽线性范围与高灵敏度，适配了细胞培养上清中低丰度细胞因子的准确定量，稳定检出了共培养体系中因子表达的细微差异。
- 直接支撑机制结论：检测结果直观显示，SIRPB1 敲除组巨噬细胞分泌的 IL-8、CCL2、IL1RA 蛋白水平显著降低，为 “SIRPB1 通过调控炎症因子重塑免疫微环境” 这一核心结论提供了最直接的蛋白水平证据。
肿瘤微环境炎症相关的Luminex 多因子检测哪里有？
乐备实提供Luminex检测服务，其检测 Panel 可灵活覆盖炎症细胞因子、趋化因子、血管生成因子、免疫调控介质等上百种靶标，包含胶质瘤微环境研究中核心的 IL-8、CCL2、IL1RA、TNF-α、VEGF 等效应分子，也可根据研究方向定制专属检测组合，精准适配各类实体瘤的免疫微环境解析、靶点机制验证、生物标志物筛选等科研需求。
| 文章中所用货号 | 产品名 | 检测指标 |
| LXLBH27-1 | 人细胞因子-27因子检测服务 | G-CSF,GM-CSF,IFN-γ,IL-10,IL-12(p70),IL-13,IL-17A,IL-1β,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-7,IL-8/CXCL8,MCP-1/CCL2,MIP-1β,TNF-α,IL-1Rα,IL-9,IL-15,FGF-basic,Eotaxin/CCL11,IP-10/CXCL10,MIP-1α/CCL3,PDGF-BB,RANTES,VEGF-A |
乐备实（上海优宁维生物科技股份有限公司旗下全资子公司），是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、PLA蛋白互作、多色免疫组化、DSP空间多组学等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。
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