图 1.折射率的定义与计算公式，n=c/v

一、一款好的封片剂的需要满足什么要求？
综合文献的规范，一款性能良好的封片剂需满足以下主要的要求：
1.光学性能良好：折射率尽可能接近玻璃（约 1.5），无色透明，无自发荧光干扰；
2.染色兼容性好：不造成染色扩散、浸出或褪色，不与染色产物、免疫组化/杂交反应产物发生反应；
3.固化性能稳定：固化速度适中，固化后无粘性，不从盖玻片边缘回缩，固化过程无结晶、开裂、收缩现象；
4.组织相容性佳：可充分渗透填充组织间隙，不对组织成分与形态造成不良影响；
长期稳定性强：可抑制微生物生长，耐受氧化与 pH 变化，固化后各项性能长期保持稳定；
5.工艺适配性高：与对应脱水剂、透明剂完全互溶，操作便捷，多余试剂易清洁。

图 2. 性能优异封片剂应满足的性质

二、封片剂怎么分类?有哪些典型代表？
按照溶剂体系与化学性质，长期保存制片用封片剂可分为水性封片剂（亲水/非粘附型）与有机溶剂型封片剂（疏水/粘附型，又称树脂型封片剂）两大类。

（一）水性封片剂
水性封片剂以水为溶剂体系，适用于苏丹类脂肪染色等会被酒精、二甲苯脱色的样本，可直接从水相封片，无需脱水透明步骤。这类封片剂通常需添加抑菌剂以抑制真菌生长，部分液态剂型需配合封边剂使用。根据固化状态可分为可固化型与液态型两类。

典型代表 1：甘油明胶
甘油明胶是脂肪染色的经典标准封片剂，为液态型水性封片剂，折射率约 1.47，由明胶、甘油与抑菌剂配制而成。使用前需经水浴加热融化，操作门槛相对较高，固化后具备一定硬度，长期保存需配合封边剂密封盖玻片边缘。其优势为配方温和，不会造成组织皱缩与色素溶解，成本低廉、制备简便。

典型代表 2：Aqua-Poly/Mount
Aqua-Poly/Mount 是商品化可固化型水性封片剂的经典款，为水溶性、无自发荧光配方，折射率为 1.454~1.460，适配免疫荧光、冰冻切片、脂肪染色、免疫组化等多种需水相封片的实验场景，未完全固化时可通过水或缓冲液浸泡去除以修正封片失误，是实验室普遍应用的通用型水性封片剂。
 

图 3. 商品化的水性封片剂典型代表

（二）有机溶剂型（树脂型，俗称油性）封片剂
树脂型封片剂以天然或合成树脂为主要成分，溶解于苯、甲苯、二甲苯等有机溶剂中，是常规 HE 染色等长期保存制片的主流选择，也常被称为油性封片剂。这类封片剂通过溶剂挥发实现固化，固化后折射率接近固定组织蛋白，对盖玻片的粘附力较强，可支持样本长期保存；缺点是样本需先经脱水、透明步骤才能封片，所含有机溶剂多具有一定毒性。

典型代表：中性树脂
中性树脂是实验室应用普遍的合成类树脂封片剂，折射率约 1.52，多以二甲苯为溶剂配制而成。其固化速度适中，固化后形成坚韧均匀的透明树脂层，对 HE、常规特殊染色及多数酶促显色样本的染色保存效果稳定，适配病理样本的长期归档需求。多余的封片剂可经二甲苯擦拭清洁，操作适配性较强；固化过程中存在一定的边缘回缩倾向，足量滴加可降低该现象的影响。因含有机溶剂，操作需在通风橱内进行，避免吸入挥发气体。

除中性树脂外，常见的油性封片剂还包括天然树脂类与其他合成树脂类，典型代表如下：

1. 加拿大树胶：天然树脂类封片剂的经典品类，折射率 1.52~1.54，来源于香脂冷杉树皮的油树脂。其长期保存稳定性较好，历史上曾作为病理制片的标准封片剂，规范存档的样本可保存数十年仍保持可用的光学性能。但该产品固化周期较长，随存放时间延长会逐渐变黄、酸化，对阳离子染料的保存效果有限，且需以二甲苯为溶剂，目前常规临床应用已逐步减少。

2. 其他合成树脂品类：如 Permount、Eukitt 等，均为有机溶剂体系的合成树脂封片剂，在固化速度、粘度、染色兼容性上各有特点，可根据实验流程与样本类型适配选用。

三、封边剂又是什么？在实验中有什么作用？
封边剂又称密封剂，用于涂抹盖玻片边缘，主要作用为密封封片剂、防止溶剂蒸发与空气氧化，延长样本保存时间。液态水性封片剂、甘油基封片剂通常需额外封边；树脂型封片剂可通过溶剂挥发自行固化，一般无需额外封边。

实验室常用封边剂包括以下几类：
1.石蜡：仅用于临时封边，需加热后用专用烙铁涂抹；
2.指甲油：操作简便，有无色与有色款均可使用，密封良好的液态样本可保存数月；
3.沥青基胶：多为软管包装，可直接涂抹，能形成长效密封层；

此外，凡士林、蜂蜡、蜡-松香混合物等也可根据实验需求选用。

四、不同实验场景下应该选择什么类型的封片剂？
（一）常规病理染色场景
常规 HE 染色等需长期归档的石蜡切片，优先选择树脂型封片剂，其固化后稳定性强，可满足长期保存需求。脂肪染色、冰冻切片等不耐受有机溶剂的样本，需选择水性封片剂，避免染色脱失与组织皱缩。

（二）免疫化学染色场景
免疫化学染色包括酶标显色与荧光标记两类，封片剂选择需匹配标记物特性：
1.酶标显色样本：水性封片剂适配绝大多数酶标显色体系；树脂型封片剂仅适用于显色沉淀不溶于脱水酒精的体系。
2.荧光标记样本：可直接选择水性封片剂，从水相完成封片，无需脱水透明；若需更长时间的样本保存，可经乙醇脱水、二甲苯透明后，采用树脂型封片剂封片。

五、封片操作要点与质量控制
（一）封片方式
实验室常用以下三种封片方式，均可实现无气泡封片：
1.玻片法：将封片剂滴加于载玻片的组织区域，以约 45°角缓慢放下盖玻片，依靠表面张力使封片剂均匀铺展；也可将盖玻片置于吸水纸上，倒扣载玻片吸附封片剂后再转正调整位置。
2.盖玻片法：将封片剂滴于盖玻片中央，倒扣载玻片，依靠表面张力吸附盖玻片，适合批量操作。
3.自动封片机法：适用于样本量较大的病理实验室与检测机构，可实现标准化批量封片。设备通过定量滴加模块将封片剂均匀涂布于组织区域，配合机械臂自动完成盖玻片抓取与贴合，适配大样本量制片场景。使用时需根据封片剂的溶剂类型（树脂型/水性）选择适配机型，调整对应滴加参数与固化条件；采用有机溶剂型封片剂时，设备需配备配套通风装置，避免有机溶剂挥发气体蓄积。

（二）用量控制与问题处理
封片剂用量需适度：用量过少会导致盖玻片边缘产生气泡，强行按压易损伤样本三维结构；用量过多会污染样本、推动组织移位，且高倍油镜工作距离偏短，过量封片剂会导致无法成像。

少量气泡可通过轻压盖玻片排出；若气泡较多，无需反复调整，树脂型封片可浸入二甲苯取下盖玻片重新封片，未固化的水性封片可水洗后重新操作。

（三）保存注意事项
光照是染色褪色的主要诱因，封片完成后的样本应避光存放，可有效延长保存周期。

六、封片常见问题
Q1：冰冻切片、脂肪染色、免疫荧光样本，能否使用树脂封片剂？A1：不能使用有机溶剂型树脂封片剂，二甲苯、酒精会造成荧光淬灭、脂肪染色脱失、组织皱缩。优先选用水性封片剂，无需脱水透明，直接水相封片适配该类样本。

Q2：封片后显微镜下成像模糊对比度低主要原因是什么？
A2：主要是封片剂折射率与组织蛋白（RI 1.53 ≈ ）以及玻璃盖玻片（RI 1.5 ≈ 2）匹配度差，光线穿过不同介质时发生了明显偏折或散射。

Q3：使用水性封片剂封片产生大量气泡，该如何补救？
A3：未完全固化时，直接用缓冲液浸泡洗脱盖玻片，重新封片；封片时采用 45°斜放盖玻片缓慢铺展试剂，控制用量适中，少量微小气泡可轻压盖玻片排出。

Q4：甘油明胶水性封片剂长期存放易干缩、开裂，怎么延长样本保存时间？
A4：甘油明胶为液态水性封片剂，固化硬度不足，封片后需用指甲油、沥青胶等封边剂涂抹盖玻片四周密封，隔绝空气蒸发；样本全程避光存放减缓老化。

七、总结
目前市售与实验室自制封片剂品类丰富，水性与树脂型体系均有多种产品，可覆盖绝大多数病理与科研实验需求。不存在完全理想的封片剂，折射率匹配是选型的主要原则，实际工作中需结合样本类型、染色体系与保存周期，选择适配度较高的封片剂与操作方案，以兼顾成像质量与样本长期保存效果。

参考文献
[1] Saify F, Tiwari N. Mounting Media - An Untouched Aspect[J]. Oral and Maxillofacial Pathology Journal, 2020, 11(1): 20-24.

[2] Ravikumar S, Surekha R, Thavarajah R. Mounting media: An overview[J]. Journal of Dr. NTR University of Health Sciences, 2014, 3(Supplement-1): S1-S8.

[3] Science Facts. Refractive Index: Definition, Formula, and Applications [EB/OL]. [2026.06.29].

本文基于Aqua-Poly/Mount相关公开资料及公开学术研究资料由其中国提供商上海曼博生物整理，用于科研信息分享、实验参考等。上海曼博生物可提供 Aqua-Poly/Mount水性封片剂、水性封片剂、病理封片剂及各类组织病理实验相关试剂与技术支持（www.mine-bio.com/poly_mount/），支持冰冻切片、脂肪染色、免疫荧光、免疫组化、组织病理染色、科研样本制备与显微成像分析等应用。