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Blue Pippin片段分选仪助力多组学测序解析蚂蚁嗅觉基因调控新机制

2026-07-20     来源:微信公众号     点击次数:68

《Nature》-蚂蚁嗅觉基因选择性表达机制新发现

蚂蚁的生存与社交主要依赖嗅觉,嗅觉感觉神经元(Olfactory Sensory Neuron,OSN)必须遵循“一个神经元一种受体”的规则,这是蚂蚁识别同伴、导航与归巢的核心保障。这要求每个嗅觉感觉神经元必须从数百个嗅觉受体(Olfactory receptor,Or)基因中精准表达单个基因。然而蚂蚁的Or基因多以串联阵列形式存在,其数量远超果蝇,且调控机制又独立于哺乳动物。因此如何实现这种高度专一的基因表达,长期以来都是困扰科研界的谜题。

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纽约大学、佛罗里达大学等团队以哈氏滑胸蚁(Harpegnathos saltator)为研究对象,首次揭示了蚂蚁通过独特的转录干扰机制调控Or基因选择性表达的分子路径,相关内容于2025年10月发表于《Nature》,题为“Transcriptional interferences ensure one olfactory receptor per ant neuron”。研究团队联合多组学分析,阐明蚂蚁将"有缺陷的转录终止"转化为精密的调控工具,实现了"激活一个,沉默全部"的表达模式。

为破解蚂蚁Or基因的表达调控机制,研究团队应用多组学联合测序(Multiome Sequencing)技术,构建了从基因转录到染色质状态的完整研究体系:通过单细胞核RNA-seq(snRNA-seq)与单细胞核ATAC-seq(snATAC-seq)明确基因表达模式与染色质可及性;利用长读长RNA-seq(Iso-seq)解析转录本结构;借助CUT&RUN技术分析组蛋白修饰状态。

为确保测序数据的有效性和针对性,文中多次使用Blue Pippin全自动DNA片段分选仪对测序样本进行精准的DNA片段筛选回收,具体实验步骤:

01  5'-capped/5'-phosphorylated RNA 转录组测序文库的片段选择

5'转录组测序更侧重“研究基因的结构和调控机制”,适合探究转录起始、可变剪接、免疫组库这些更细致的问题,能提供更深入的基因调控信息。在 “5' 端 RNA 测序” 实验中,先通过 PCR 扩增获得目标片段,然后使用BluePippin全自动DNA片段分选仪进行两次DNA片段分选回收(DNA size selection):

 首次DNA分选:从 PCR 扩增产物中进行DNA特定片段筛选:200–400 bp,精准去除过短(如引物二聚体)或过长(如非特异性扩增产物)的杂质,确保文库片段符合NGS测序平台(NextSeq500/NovaSeq X Plus)的要求;

 二次DNA分选:对首次分选后的产物进行二次 PCR 扩增后,再次使用 BluePippin 筛选250–450 bp的片段,对DNA片段大小筛选进一步优化文库片段长度分布,提升测序数据的准确性,避免因片段长度不均导致的测序偏差。

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02  CUT&RUNDNA-蛋白质相互作用测序文库的全自动DNA片段筛选

CUT&RUN(染色质免疫沉淀靶向切割与释放),即核酸酶靶向切割和释放,是一种使用靶标特异性一抗和Protein A - Protein G - 微球菌核酸酶 (pAG-MNase) 分离特异性蛋白-DNA 复合体的体内方法,在CUT&RUN实验中,文库构建完成后,使用 BluePippin全自动核酸切胶仪2%预制胶试剂盒,筛选并回收185–600 bp DNA 片段:

 ​保留与组蛋白结合的短片段染色质(组蛋白修饰相关的 DNA 片段通常较短),去除过长的基因组 DNA 杂质,更加精准的进行靶向DNA回收/获取,确保测序数据主要来源于目标染色质区域,提高后续分析(如组蛋白修饰信号富集)的特异性。

研究团队最终揭示了蚂蚁Or基因选择性表达的独特机制:

01   转录通读现象:

单个Or基因启动子被激活后,RNA聚合酶II因转录终止缺陷(而非多聚腺苷酸化缺陷),会持续转录下游所有基因,形成“阶梯式”共转录模式,但转录水平随距离增加逐渐降低。

02   双向转录干扰:

下游基因的转录本因无5'帽结构无法翻译,上游基因则被激活启动子驱动的长链反义转录本沉默,最终仅首个激活基因表达功能性蛋白。

03   染色质状态特征:

Or基因阵列整体富集抑制性组蛋白修饰H3K27me3,且无共享增强子,每个Or启动子自身包含完整调控元件。

这一机制既区别于哺乳动物的“随机选择+负反馈”,也不同于果蝇的“转录因子确定性调控”,是蚂蚁为适应Or基因串联扩张而独立进化的解决方案。

Blue Pippin全自动DNA脉冲场电泳分选回收仪
全自动DNA脉冲场电泳回收仪
回收范围:100bp-基因组DNA

厂家介绍

Sage Science 公司位于美国马萨诸塞州,2010年成立,专注于核酸领域的样品制备,2万篇文献中应用,包括众多Nature、 Science、 Cell系列的文章,是全球科研领域广泛选用的主流核酸片段分选设备。

 全自动回收:采用双通道电泳回收专利技术,回收过程全自动运行;
 精准回收:精确度可达93-99%,相较传统手工切胶、磁珠分选方案,片段分离精度更优异
 微量回收:低起始量,低至ng级,控制时间回收,不直接检测样品
 高回收率:50-80%的高回收得率
 省时间:5分钟的手工操作时间,无需额外制胶和切胶
 ​全自动完成DNA片段分选, 软件中自由选择需要筛选的片段范围,免去了切胶纯化的繁琐步骤,比核酸片段筛选磁珠更加精准可控;

应用领域
 用于DNA常规分子生物学,精准去除PCR引物二聚体、非特异性片段等,去除酶切产物中非目标DNA条带;
 用于小片段DNA筛选回收(DNA Size Selection),如小RNA/small RNA文库回收、cfDNA/ctDNA循环血游离DNA/循环血肿瘤DNA测序文库、ddRAD-SEQ双酶切简化基因组测序文库、16S文库微生物测序文库回收等、ChIP-seq文库、MeDIP-seq / hMeDIP-seq甲基化DNA免疫沉淀片段测序文库、ATAC-seq转座酶可及染色质高通量测序文库、遗传病 panel 扩增子文库等各种复杂样本的处理,提高测序数据质量;
 用于大片段DNA精准回收(几kb、几十kb甚至几百kb),如Pacbio HiFi文库构建、纳米孔测序建库、超长测序(Ultra-Long Sequencing)文库构建等,精准去除小片段DNA,提高测序质量,降低测序成本;
 低起始量样品的精准浓缩回收:血浆/血清cfDNA/ctDNA,微量细胞/单细胞,空气/冰川/岩石样本,低丰度病原体等;
 降解样本的精准浓缩回收:FFPE(石蜡切片)、古DNA、腐烂样本、RNA样本等;
 背景极高的复杂样品的精准筛选回收:废水、土壤、腐殖质、粪便、肠道内容物、痰液、脓液、临床拭子、血液、脑脊液、共生微生物、食品微生物等

参数

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分离范围

100 bp–基因组DNA

单孔最大上样量

10μg

电场模式

直流高压 / 低压、脉冲场交变电场

回收模式

窄范围回收、宽范围回收、High Pass大片段回收、Range+T回收

回收方式

自动化回收

准确率

设定值 ±2%(501-600bp)

重复性

99%(501-600bp)

大片段准确率

30-40kb范围>90%

环亚生物:为科研提供 “全链条” 支持

环亚生物科技有限公司(APG BIO)系美国 Sage Science 核酸片段回收产品线中国区域独家授权代理商,可向国内二代、三代测序相关科研及企业客户,提供包含样本前处理、核酸质控在内的成套设备解决方案,产品阵列包含组织研磨设备、单细胞制备仪器、细胞破碎仪、超声核酸打断仪、全自动 DNA 片段分选回收仪、核酸片段分析仪、脉冲场电泳仪、全自动建库仪、荧光检测仪、超微量分光光度计等设备。

更多资讯请访问文献全文链接:https://doi.org/10.1038/s41586-025-09664-x
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