红外光密度法助力解决经皮给药研究中胶带剥离标准化难题
2026-08-07 来源:本站 点击次数:175
在经皮给药或化妆品渗透研究中，研究者常按固定次数贴撕胶带——前臂20次、腹部30次。问题是：不同个体的角质层厚度、部位角化程度差异很大，固定次数要么没剥透，要么已经伤到颗粒层。更麻烦的是，若后续要用同一条胶带做蛋白、脂质或RNA分析，必须先知道“这条胶带到底取了多少角质量”，否则数据无法归一化。
传统上有三条路。一是称重法：贴前贴后称量胶带，差值即为角质量。它直接，但易受静电、残留赋形剂和湿度干扰，且操作繁琐。二是蛋白提取法（如BCA）：把胶带上的蛋白洗下来定量，准确性高，但破坏样本，无法再做下游检测。三是比色法：在胶带上直接显色，成本低，但步骤多、批次稳定性差，样本同样被破坏。[3]
红外光密度法（IR-D）提供了另一种思路。以Labodorf 850C皮肤角质量测试仪为例，它用约850 nm红外光照射贴有角质层的胶带，测量光强衰减，再通过与蛋白含量的标准曲线换算，快速得到该条胶带的角蛋白量。胶带测完后仍可保留，用于后续的蛋白组学、炎症因子或脂质分析。
Hahn等2010年在《Skin Pharmacol Physiol》发表的研究[1]可以说明这一方法的价值。他们用红外密度法对体外人皮进行胶带剥离，将IR-D计算的角质层深度与BCA蛋白测定结果对比，发现新鲜皮肤与−26 °C冷冻保存1周、1个月乃至3个月的皮肤，两者一致性良好。研究还发现，当IR-D读数低于定量下限时，剩余角质层不足总量的5%，这意味着研究者可以据此判断“是否已经剥透”，而不是凭经验固定次数。
另一项来自Clausen等2016年《Sci Rep》的研究[2]则展示了它在疾病研究中的应用。团队用IR-D对特应性皮炎（AD）患者与健康对照进行胶带剥离，比较总蛋白与可溶性蛋白含量。结果显示，AD皮损区可溶性蛋白占比高达82%，而健康皮肤仅为17%–24%；同时，AD患者总蛋白量显著低于健康对照。这类差异如果缺少快速蛋白定量手段，很难在大规模样本中系统捕捉。
选型时不必迷信单一指标。如果你的目标是快速判断有没有剥透，同时还想把胶带留下来做后续分析，那选IR-D是首选。如果实验对绝对蛋白浓度的要求特别高，那还是建议先拿BCA法做一部分样本的方法学验证作为对照。要是只是为了初步筛查，经费又不太宽裕，用称重法也能凑合用，就是环境湿度、温度这些条件要控制好，不然数据容易乱飘。
常见问答：
红外光密度法测出来的到底是水分还是蛋白？
测的是胶带上面角质层蛋白对红外光的吸收，这个吸收值和蛋白含量是线性相关的，跟皮肤含水量没关系。
测完之后，胶带还能不能用来做别的检测？
可以。这个方法不会破坏样品，后续想做什么蛋白、脂质、RNA或者组学分析，胶带照样能拿来用。
不同部位需不需要单独建标准曲线？
前臂、面部还有肤色偏深的部位，回归曲线的斜率会有点差别。建议要么按实际采样的部位重新校准，要么直接引用对应部位已有的校准曲线来换算。
参考文献：
1. Hahn T, Hansen S, Neumann D, et al. Infrared densitometry: a fast and non-destructive method for exact stratum corneum depth calculation for in vitro tape-stripping. Skin Pharmacol Physiol. 2010;23(4):183-192. DOI: 10.1159/000288165
2. Clausen ML, Slotved HC, Krogfelt KA, Agner T. Tape stripping technique for stratum corneum protein analysis. Sci Rep. 2016;6:19918. DOI: 10.1038/srep19918
3. Mohammed D, Hadgraft J, Lane ME. Comparison of gravimetric and spectroscopic approaches to quantify stratum corneum removed by tape-stripping. Eur J Pharm Biopharm. 2012;82(2):368-372.
传统上有三条路。一是称重法：贴前贴后称量胶带，差值即为角质量。它直接，但易受静电、残留赋形剂和湿度干扰，且操作繁琐。二是蛋白提取法（如BCA）：把胶带上的蛋白洗下来定量，准确性高，但破坏样本，无法再做下游检测。三是比色法：在胶带上直接显色，成本低，但步骤多、批次稳定性差，样本同样被破坏。[3]
红外光密度法（IR-D）提供了另一种思路。以Labodorf 850C皮肤角质量测试仪为例，它用约850 nm红外光照射贴有角质层的胶带，测量光强衰减，再通过与蛋白含量的标准曲线换算，快速得到该条胶带的角蛋白量。胶带测完后仍可保留，用于后续的蛋白组学、炎症因子或脂质分析。
Hahn等2010年在《Skin Pharmacol Physiol》发表的研究[1]可以说明这一方法的价值。他们用红外密度法对体外人皮进行胶带剥离，将IR-D计算的角质层深度与BCA蛋白测定结果对比，发现新鲜皮肤与−26 °C冷冻保存1周、1个月乃至3个月的皮肤，两者一致性良好。研究还发现，当IR-D读数低于定量下限时，剩余角质层不足总量的5%，这意味着研究者可以据此判断“是否已经剥透”，而不是凭经验固定次数。
另一项来自Clausen等2016年《Sci Rep》的研究[2]则展示了它在疾病研究中的应用。团队用IR-D对特应性皮炎（AD）患者与健康对照进行胶带剥离，比较总蛋白与可溶性蛋白含量。结果显示，AD皮损区可溶性蛋白占比高达82%，而健康皮肤仅为17%–24%；同时，AD患者总蛋白量显著低于健康对照。这类差异如果缺少快速蛋白定量手段，很难在大规模样本中系统捕捉。
选型时不必迷信单一指标。如果你的目标是快速判断有没有剥透，同时还想把胶带留下来做后续分析，那选IR-D是首选。如果实验对绝对蛋白浓度的要求特别高，那还是建议先拿BCA法做一部分样本的方法学验证作为对照。要是只是为了初步筛查，经费又不太宽裕，用称重法也能凑合用，就是环境湿度、温度这些条件要控制好，不然数据容易乱飘。
常见问答：
红外光密度法测出来的到底是水分还是蛋白？
测的是胶带上面角质层蛋白对红外光的吸收，这个吸收值和蛋白含量是线性相关的，跟皮肤含水量没关系。
测完之后，胶带还能不能用来做别的检测？
可以。这个方法不会破坏样品，后续想做什么蛋白、脂质、RNA或者组学分析，胶带照样能拿来用。
不同部位需不需要单独建标准曲线？
前臂、面部还有肤色偏深的部位，回归曲线的斜率会有点差别。建议要么按实际采样的部位重新校准，要么直接引用对应部位已有的校准曲线来换算。
参考文献：
1. Hahn T, Hansen S, Neumann D, et al. Infrared densitometry: a fast and non-destructive method for exact stratum corneum depth calculation for in vitro tape-stripping. Skin Pharmacol Physiol. 2010;23(4):183-192. DOI: 10.1159/000288165
2. Clausen ML, Slotved HC, Krogfelt KA, Agner T. Tape stripping technique for stratum corneum protein analysis. Sci Rep. 2016;6:19918. DOI: 10.1038/srep19918
3. Mohammed D, Hadgraft J, Lane ME. Comparison of gravimetric and spectroscopic approaches to quantify stratum corneum removed by tape-stripping. Eur J Pharm Biopharm. 2012;82(2):368-372.
相关文章
更多 >