一、实验前准备-全套试剂耗材

组织样本处理-所用全套试剂耗材
二、样本取材及预处理

1、对小鼠实施安乐,在皮毛线以上部位的基部截断耳部;
2、在无菌培养皿表面放置耳组织,使用镊子在组织上划线去除多余毛发,用弯头镊子将耳组织沿背腹方向切开,分成2部分-背侧和腹侧。
3、将皮肤组织(100mg)加入含有解离液200μL的5mL离心管中,用细剪将皮肤组织切成极小碎片,直至形成糊状物;
三、标准化组织解离步骤参考
1、组织消化解离

(1) 向离心管中再加入1.8mL组织解离液,涡旋混匀后放入水平摇床中,37℃,120转/分钟,消化90分钟;
(2) 后向试管中加入40 μL的0.5MEDTA溶液(abs9133)终止消化,涡旋混合后继续孵育10分钟(37℃,120转/分钟);
(3) 消化完成后取出离心管,将滤液和破碎组织通过无菌70 μm 细胞筛过滤至新的50mL离心管中,并使用5mL的1xPBS缓冲液(abs962)冲洗装过滤液的离心管并过滤,获得细胞悬液;
(4) 将细胞悬液在4℃条件下,400×g离心5分钟,弃去上清液。
(5) 使用适量1xPBS缓冲液(abs962)重悬细胞沉淀,可以用于后续分析。
四、流式结果展示

小鼠皮肤组织单细胞悬液染色结果(abs50227)