线粒体氧化磷酸化系统由五个多亚基酶复合物组成，其中ComplexV（ATP合酶）在细胞能量转换中起核心作用。当跨膜质子电化学梯度较低时，ComplexV可逆向作为ATPase工作，水解ATP以泵出质子，从而恢复线粒体膜电位。

编码ComplexV生物合成的相关基因突变会导致ComplexV缺陷，引发严重的代谢缺陷和神经退行性疾病，包括新生儿期Leigh综合征、脑心肌病，以及早发或晚发神经病变、共济失调、视网膜色素变性等。然而现有的ComplexV活性检测存在固有不足，或无法反映完整线粒体中Complex V的工作方向，或需要大量组织样本，临床上亟需一种微量、微创的Complex V活性检测方法来评估患者。

作者单位：英国伦敦大学学院QueenSquare神经学研究所
期刊：PLOSOne
发表年份：2025年
样本：外周血单核细胞（PBMCs）
分析设备：美国 Precision cell systems 公司MoxiGOII 库尔特流式细胞仪 本研究开发了三种互补的微量检测方案来评估PBMCs中ComplexV的活性和组装，包括分光光度法、ΔΨₘ流式分析（图1）和透明天然凝胶电泳分析。
ΔΨₘ分析：取 ≥4×10⁴个PBMCs，经TMRM染色和不同线粒体毒素（寡霉素A、FCCP、鱼藤酮+抗霉素A）处理后，取 70μL 细胞悬液（约 3×10⁴个细胞），采用美国Orflo公司的MoxiGOII库尔特流式细胞分析仪通过561nm长通滤光片进行分析。仪器对>6μm的细胞设门，通过荧光强度测定TMRM阳性细胞（即门控细胞）占总细胞群体的比例，以此反映线粒体膜电位（ΔΨₘ）的变化。

结果显示（图2）： 寡霉素A抑制ComplexV导致ΔΨ超极化（门控细胞比例增加约48%），表明呼吸链功能正常且ComplexV正向作为ATP合酶工作；鱼藤酮+抗霉素A抑制呼吸链导致ΔΨₘ去极化（门控细胞比例减少约36%），ComplexV逆向作为ATPase工作；添加质子载体 FCCP 后阳性细胞平均下降 52%，膜电位完全溃散。经3天寡霉素A长期处理后，ΔΨₘ显著下降，提示呼吸链功能受损。同时，分光光度法检测显示逆向ComplexV活性呈剂量依赖性下降；透明天然凝胶电泳结合Westernblot分析显示ComplexV组装水平也呈剂量依赖性下降。 左图为各组原始细胞散点（门控＞6 μm，X轴细胞尺寸线性，Y 轴荧光对数）；右图荧光分布直方图，灰色为无胁迫对照组、蓝色为寡霉素组、红色为鱼藤酮 + 抗霉素A组、粉色为FCCP组
本研究建立了分光光度活性测定、ΔΨ细胞化学检测（美国Orflo公司的MoxiGOII库尔特流式细胞分析仪）、无色天然凝胶免疫印迹组装分析三套微量检测方案，仅需 2 毫升全血分离的 2×10⁶个外周血单个核细胞即可完成检测。外周血单个核细胞可作为微创样本载体，用于疑似复合物 V 缺陷患者临床筛查及线粒体功能生物标志物基础研究。

原文链接：https://doi.org/10.1371/journal.pone.0323136
Orflo公司的 Moxi 系列库尔特细胞计数仪及流式细胞仪，依托微流控库尔特电阻抗技术，突破传统光学检测的瓶颈，以高精度、高重复性、极速检测、极简操作、零维护的核心优势，实现了细胞计数技术的全面升级。

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活率测量更灵敏，更精准
开机即用，10秒出测试结果，使用后无需清洁维护
应用于精准细胞计数、健康评估、单细胞测序文库质控、CAR-T 细胞治疗质控、凋亡/转染检测、活性氧簇、线粒体膜电位等常规流式细胞分析等