PI 通道干扰大?7-AAD 解锁高精度流式细胞活死分选
一、什么是 7-AAD 溶液?
7-AAD溶液为 50μg/mL 即用型核酸荧光染料,属于非细胞膜通透性探针,优先结合 DNA 的 GC 富集区域。完整活细胞的细胞膜可以阻挡染料进入;晚期凋亡、坏死细胞的细胞膜破损,染料可进入胞内结合 DNA,发出远红色荧光,激发峰值 546 nm,发射峰值 647 nm。试剂 2-8℃避光储存,染色操作全程避光,主要用于流式细胞术甄别死细胞,仅限科研使用,不可用于临床诊断。
二、和 PI 碘化丙啶相比,7-AAD溶液具备哪些技术差异?
PI 同样为非渗透性死细胞染料,但发射光谱宽,与 FITC、PE 通道荧光重叠大,多色流式补偿压力高;PI 可同时结合 RNA,做细胞周期分析需要额外 RNase 处理。7-AAD溶液发射光谱更窄,处于远红光波段,与 488nm 激发的 FITC、PE 干扰小,更适合多色流式;偏好结合 GC 富集 DNA,不与 RNA 结合。缺点是 7-AAD 不适合单独用于细胞周期检测,PI 在该场景更具优势;二者均不能穿透完整活细胞。
三、7-AAD 溶液适用于哪些科研实验?
7-AAD溶液仅限科研,不可临床诊断。主要用于流式细胞术细胞活力甄别,常与 Annexin-V 联合开展凋亡检测;适配多色流式免疫分型、细胞毒性实验,可搭配 FITC、PE 等荧光标记。样品需制备成良好单细胞悬液,按照每 1×10⁶细胞添加 5μL 染料,室温避光孵育 5-15 min,依据细胞类型优化孵育时间;染色完成尽快上机检测。该染料不能用于活细胞标记,也不推荐单独用于细胞周期分析。
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