关键词：UNC5C突变；活细胞成像；细胞凋亡

我们实验室常用CCK8/MTT，以及细胞流式检测细胞增殖、凋亡，Wetzel-Smith MK团队在对阿尔兹海默症疾病（AD）进行研究时，创新的通过活细胞延时摄影成像实时观察细胞状态，可视化增殖凋亡状态，以及荧光强度。

实验方法
一、通过活细胞成像仪以及荧光实时观察转染后HEK293T细胞的增殖和凋亡（图f），并分析了不同时间段下，细胞的平均寿命以及生存曲线（图g-h）。

图f：caspase-3或caspase-7激活是细胞凋亡的标志性步骤之一，结果显示：T835M UNC5C过度表达的细胞比WT UNC5C过度表达的细胞死亡倾向更高。

图g：T835M UNC5C缩短了平均细胞寿命，显著降低了生存率。

图h：实时观察下，T835M UNC5C过度表达的细胞的存活率更低。

绿色荧光：T835M UNC5C过度表达的细胞。

红色荧光：caspase-3或caspase-7激活

延时观察视频（HEK293T细胞红绿荧光）

二、鉴于UNC5C的神经元表达，采用了活细胞成像方法监测表达和细胞死亡的时间进程，探讨T835M UNC5C的表达是否会改变大鼠海马神经元对死亡的敏感性。（图4e-g）

图e：48h和116h下，转染了β-gal、WT和T835M UNC5C的海马神经元的细胞状态：转染了T835M UNC5C的神经元数量减少；

图f：连续监测下，检测GFP细胞数量：T835M UNC5C的荧光量减少；

图g：WT和T835M UNC5C组的相对存活率：T835M UNC5C的神经元存活率更低

实时荧光表达视频

转染目的基因的海马神经元

Wetzel-Smith MK团队使用活细胞成像检测了细胞的存活、凋亡以及荧光表达曲线，代替了传统的CCK8和流式等方法，实现了实时动态、同样本长时追踪，同步记录形态、增殖、凋亡、荧光信号连续变化，还原完整细胞生物学事件时序。

该技术同样适配肿瘤药理、神经细胞损伤、药物筛选等常规细胞实验。

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