▲SQ22536 (T2172)，CAS: 17318-31-9的化学结构式

SQ22536 (T2172)，CAS: 17318-31-9 是一种腺苷类似物，可作为腺苷酸环化酶的非竞争性抑制剂，直接下调该膜相关酶将 ATP 转化为环磷酸腺苷（cAMP）的催化能力。在鲶鱼（Ictalurus melas）粗膜制备和大鼠分离肝细胞中，SQ22536 以与激动剂浓度无关的方式抑制腺苷酸环化酶活性，表现为降低最大反应速率的非竞争特征，因而在经典的 cAMP 信号通路中充当位于近端的酶学级别调控工具。

在腺苷酸环化酶通路中，细胞外信号经由 G 蛋白偶联受体（GPCR）激活异源三聚体 G 蛋白，通过 Gs（促效）与 Gi/o（抑制）α 亚基以及 βγ 亚基等调节不同同工酶，控制 cAMP 脉冲的产生。cAMP 随后作用于关键效应器，包括蛋白激酶 A（PKA）、直接被 cAMP 激活的交换蛋白（EPAC）以及环核苷酸门控离子通道，从而迅速改变蛋白磷酸化、离子通量与以 CREB 为代表的转录程序 [2]。研究中常借助如福斯可林等腺苷酸环化酶激活剂定义 cAMP 产生的上限 [1]；与之相对，SQ22536 则提供在酶学层面压低该动态范围的手段。

由于 SQ22536 对腺苷酸环化酶的非竞争性作用，即使存在上游强力刺激也能减少 cAMP 生成，因此有助于区分受体/G 蛋白近端事件与酶催化能力对表型的相对贡献。在膜体系与原代细胞（如肝细胞）中，它可严格检验特定生物学输出是否依赖于腺苷酸环化酶驱动的 cAMP，而非 GPCR 信号的平行分支。具体应用包括：判定归因于 PKA 的磷酸化是否依赖 cAMP；解析 EPAC 在细胞骨架与分泌中的作用；比较 Gs 与 Gi 输入的效能；以及在与磷酸二酯酶调控联用时绘制 cAMP 网络内的反馈结构 [2]。其在鱼类膜组分与哺乳动物肝细胞中的抑制被验证，亦支持在比较生理与进化保守性研究中的价值。

在实验设计上，SQ22536 可与腺苷酸环化酶激活剂（如福斯可林）配对以限定信号操作范围 [1]，并结合 FRET 型 cAMP 传感器、PKA 底物磷酸化谱与 CRE 报告基因读出，将表型因果明确归因于酶学抑制这一关键节点 [1,2]。

■ 2. 文献分享
■ 2.1 Adipocyte-specific Zeb1 downregulation remodels the tumor-associated adipose microenvironment to facilitate female breast cancer progression
 

▲ 不同实验分组（Group）及终点指标（Endpoint）的布局示意图。

SQ22536 (T2172) 在研究中被用于评估其对PGD2相关信号的影响。于小鼠乳腺癌细胞系EO771中，RT-PCR与ELISA结果显示，预处理SQ22536可有效降低PGD2诱导的AM表达，表明该化合物能够抑制由PGD2触发的AM分子水平变化。在人源乳腺癌细胞系MDA-MB-231中也获得了相似结果，进一步支持SQ22536在不同乳腺癌细胞系中均可降低PGD2诱导的AM表达。整体而言，这些证据表明，SQ22536能够在EO771与MDA-MB-231细胞中一致地减少PGD2诱导的AM表达，且该结论由分子层面的检测指标支持。[3]

■ 2.2 Psoralen Promotes Direct Chemical Reprogramming of Mouse Embryonic Fibroblasts into Osteoblast-like Cells.

▲FP联合Psr通过激活ADCY9/PKA/CREB信号通路促进成骨分化。（A–C）成骨诱导分化实验流程示意图：骨髓间充质干细胞（BMSCs）在成骨诱导培养基（OM）中培养，分别加入FP、Psr或FP+Psr（25 μM），于第0、6、21天进行ALP染色、ARS染色、RT-qPCR、ELISA及Western blot检测。（D）第6天ALP染色代表性图像。（E）第21天ARS染色代表性图像。（F）ALP活性定量分析。（G）ARS染色定量分析。（H）成骨相关基因（Alp、Runx2、Osterix）及通路相关基因（Adcyg、Pkaca、Pkacb、Creb）mRNA表达水平的RT-qPCR检测结果。（I–J）ADCY9、PRKACB、p-CREB/CREB及ATP1A1蛋白表达的Western blot检测及定量分析。（K–N）SQ22536（AC抑制剂）干预后，FP+Psr诱导的ALP活性及蛋白表达变化，进一步验证该通路介导的成骨分化作用。数据以均值±SD表示，p < 0.05，p < 0.01，p < 0.001。

SQ22536 (T2172) 以10 μM用作腺苷酸环化酶的特异性抑制剂。在以Forskolin、Phenamil与Psoralen进行化学重编程的鼠胚成纤维细胞中，加入SQ22536显著削弱了向成骨样表型的获得，表现为碱性磷酸酶活性下降及矿化基质沉积近乎被清除。SQ22536有效阻断了细胞外cAMP的升高，并且消除了关键成骨标志基因Alp、Runx2、Bmp2与Osterix及相关信号成分的上调。在蛋白水平，SQ22536降低了Adcy9与PRKACB的诱导，且完全抑制了由重编程鸡尾酒引发的CREB磷酸化。这些结果表明，SQ22536干扰Adcy9/cAMP/PKA/CREB信号通路的激活，从而影响该体系中的成骨相关重编程效应。[4]

■ 2.3 Alamandine/MrgD Pathway Modulates Gut-Bone Marrow Axis in Aging.

▲实验分组示意图。各组样本按年龄或老化状态分为“Old”（老年）和“Older”（高龄/更老）两个主要类别，每列代表一个独立的生物学重复或处理单元。

SQ22536 (T2172) 在本研究中作为腺苷酸环化酶抑制剂用于解析调控 Wnt3a 表达的信号通路。在老年小鼠结肠来源的类器官中，300 μM 的 SQ22536 预处理降低或逆转了由 alamandine 诱导的 Wnt3a 恢复，表明腺苷酸环化酶活性对该反应至关重要。采用包括 SQ22536 在内的药理学抑制剂的实验进一步证实，alamandine–MrgD 作用引发的 Wnt3a 表达依赖于 Gαs/AC/PKA/CREB 通路。上述结果共同说明，SQ22536 通过削弱 alamandine 所致的 Wnt3a 上调，并用于确认 Gαs/AC/PKA/CREB 信号轴在该体系中的作用，从而功能性地连接了腺苷酸环化酶活性与 Wnt3a 表达的关系。[5]

■ 2.4 Targeting ecto-5'-nucleotidase (CD73) and cAMP alleviates carotid body hyperactivity and reduces blood pressure in chronically hypoxic rats.

▲SQ22356对高氧条件下神经元放电的影响。（A）不同浓度SQ22356（0.1–500 μM）处理下，神经元在高氧环境中的原始放电记录（上）及放电频率直方图（下）。（B）各组基础放电频率的统计分析。数据显示SQ22356呈浓度依赖性抑制高氧诱导的神经元过度放电。标尺：300 mV（纵轴），1 ms（横轴）；p < 0.05，p < 0.01，p < 0.001 vs. 对照组。

SQ22536 (T2172) 被明确为跨膜腺苷酸环化酶抑制剂。在本研究中，SQ22536 在慢性低氧条件下对颈动脉体功能的作用与抑制CD73所观察到的效应高度相似。作者同时指出，与CD73抑制相关的关键发现可被SQ22536（作为tmAC抑制剂）部分再现实验结果，提示环磷酸腺苷（cAMP）在慢性低氧诱导的基础化学感受传入神经亢进和增强的低氧敏感性中发挥作用。以上明示结果共同表明，SQ22536 通过抑制tmAC，实现了与CD73靶向相近的功能性影响，从而与调节颈动脉体的化学感受放电活动及其对低氧的反应性相一致。[6]

■ 3. 结语
SQ22536通过非竞争性抑制腺苷酸环化酶，降低该酶的最大催化活性，从而减少cAMP的生成，且不受上游激动剂浓度影响。文献报道中，SQ22536在多种生物体系中表现出重要作用：它能抑制乳腺癌细胞中PGD2诱导的AM表达，阻断通过Adcy9/cAMP/PKA/CREB信号通路介导的成骨样化学重编程，调控老年结肠类器官中Wnt3a的表达，并在慢性低氧模型中模拟CD73抑制对颈动脉体功能的影响。这些发现表明SQ22536是研究cAMP依赖信号通路的有效工具，有助于区分酶学层面调控与受体或G蛋白近端事件的贡献。未来可进一步探索其在比较生理学、肿瘤生物学、再生医学及低氧相关疾病中的应用，并结合传感器和磷酸二酯酶调控剂绘制cAMP信号网络动态。

■ 4. Q&A
Q1: SQ22536通过何种机制抑制腺苷酸环化酶？
A1: SQ22536以非竞争性方式抑制腺苷酸环化酶，降低其最大催化活性，不与底物竞争结合，从而在激动剂浓度无关的情况下减少cAMP生成。

Q2: 文献中SQ22536在哪些生物体系中显示出作用？
A2: SQ22536能降低乳腺癌细胞中PGD2诱导的AM表达，阻碍小鼠胚胎成纤维细胞的成骨样化学重编程，调控老年结肠类器官中Wnt3a的表达，并在慢性低氧大鼠模型中模拟CD73抑制对颈动脉体功能的影响。

Q3: 实验中如何利用SQ22536研究cAMP信号？
A3: 可与腺苷酸环化酶激活剂（如福斯可林）配合使用限定cAMP信号动态范围，结合FRET型cAMP传感器、PKA底物磷酸化分析和CRE报告基因系统，将表型变化明确归因于腺苷酸环化酶的酶学抑制。

■ 5. 参考文献
[1] Seamon KB, Daly JW, et al. Forskolin: A unique diterpene activator of adenylate cyclase in membranes and in intact cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 1981;78(6):3363-3367.
[2] Beavo JA, Brunton LL, et al. Cyclic nucleotide research—still expanding after half a century. Nat Rev Mol Cell Biol. 2002;3(9):710-718.
[3] Cao L, Sun W, Chen X, Liu L, Zhao S, Liu J, et al.. Adipocyte-specific Zeb1 downregulation remodels the tumor-associated adipose microenvironment to facilitate female breast cancer progression. Nature Communications. 2025;16(1):.
[4] Li W, Liu H, Wan X, Cheng D, Zhu R, Zhang Z. Psoralen Promotes Direct Chemical Reprogramming of Mouse Embryonic Fibroblasts into Osteoblast-like Cells.. Pharmaceutics. 2026;18(2):.
[5] Chittimalli K, Rozario H, Martinez V, McAdams Z, Adkins S, Ericsson A, et al.. Alamandine/MrgD Pathway Modulates Gut-Bone Marrow Axis in Aging.. bioRxiv : the preprint server for biology. 2026;():.
[6] Nathanael D, Coney A, Alotaibi D, Kumar P, Holmes A. Targeting ecto-5'-nucleotidase (CD73) and cAMP alleviates carotid body hyperactivity and reduces blood pressure in chronically hypoxic rats.. The Journal of physiology. 2026;604(1):626-652.