Ramos细胞源自人伯基特淋巴瘤（Burkitt's lymphoma）B 淋巴细胞，EBV阴性，悬浮生长，是B细胞信号转导、细胞凋亡及免疫球蛋白相关机制研究的常用模型。作为悬浮细胞，培养过程中不需胰酶，可通过离心收集细胞后，按合适比例稀释接种传代。

一、细胞复苏

1.【准备工作】水浴锅提前预热至37℃；准备含10%FBS的完全培养基：RPMI-1640（abs9484-500mL/SV30306.01）+10%FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+1%P/S（abs9244-100ml/SV30010），取9mL完全培养基于37℃预热；安全柜紫外30min。

2.【融化】从液氮/冰箱取出冻存管，37℃水浴快速摇晃融化，约1-2min。

3.【重悬】75%酒精擦拭冻存管外壁，安全柜内开盖，将细胞悬液沿管壁缓慢滴入含9mL预热完全培养基的离心管，轻柔混匀（悬浮细胞勿吹打）。

4.【离心】300×g离心5-10min，弃上清，去除DMSO。

5.【重悬】加入完全培养基轻轻重悬（禁止吹打，避免机械损伤），接种T25瓶（4-6mL），轻摇混匀，标注信息。

6.【培养】放入37℃、5%CO2培养箱；24-48h观察细胞密度与活率。

二、细胞传代

1.【实验准备】配制完全培养基：RPMI-1640（abs9484-500mL/SV30306.01）+10%FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+1%P/S（abs9244-100ml/SV30010）。提前取出PBS（abs962-500ml/SV30305.01）、完全培养基，恢复至室温；生物安全柜提前使用紫外照射30min。

注意：Ramos为悬浮细胞，传代无需胰酶，靠离心收集后按比例稀释接种。

2.【镜检】细胞处于对数期（密度约2-4×10⁵个/mL）、活率＞90%时准备传代；密度过大（＞1×10⁶个/mL）会导致细胞活力下降、发生细胞凋亡。

3.【细胞收集】将细胞悬液转入离心管，300×g离心5-10min，弃上清。

4.【细胞重悬】加入完全培养基轻柔重悬（禁止吹打，以免气泡损伤悬浮细胞）。

5.【传代】按1:4-1:10接种至新瓶，补加完全培养基至工作体积，轻摇混匀，标注信息。

6.【镜检】镜下确认细胞单个悬浮、无结团，放入37℃、5%CO₂培养箱，2-3天观察。

注意：悬浮细胞严禁胰酶消化；收集后轻柔重悬，吹打产生气泡会损伤细胞；Ramos 增殖快，每2-3天传代，维持对数期密度。

三、细胞冻存

1.【准备工作】冻存液：无血清细胞冻存液（abs9417-100mL）或90% FBS（货号：abs972-500mL/SV30302.03）+10% DMSO（abs9187-100mL）；冻存管标注信息；安全柜紫外30min。

2.【细胞收集】取对数期细胞，300×g离心5-10min，弃上清。

3.【细胞重悬】加入冻存液（约1mL/管）轻柔重悬，细胞密度约2-5×10⁶个/mL。

4.【冻存】每管1mL入冻存盒，-80℃过夜后转液氮长期保存。

四、关键注意事项

1、悬浮特性

（1）无酶收集，离心后稀释接种；

（2）轻柔重悬，禁止吹打；

（3）维持对数期密度，避免过密。

2、传代比例与密度

（1）分裂比1:4-1:10，每2-3天；

（2）建议密度2-10×10⁵个/mL，过高易细胞凋亡。

3、形态与污染判断

（1）正常：圆球形、单个悬浮、透亮；

（2）异常：成团、碎片增多、培养基浑浊（污染/支原体）。

参考资料

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