MCF-7 为 1973 年自人乳腺癌恶性胸腔积液转移灶建立的人乳腺癌细胞系，常归为 Luminal A 样：ERα+、PR+但 PR偏低、HER2−，适用于 ERα/雌激素信号、内分泌治疗及 TAMR/LTED/氟维司群耐药研究，不宜作为高侵袭转移模型。细胞上皮样贴壁、生长缓慢、具接触抑制，倍增相对温和，汇合后多单层生长；腺样或 domes 结构仅见于特定条件，培养避免过度消化，控制接种密度与汇合度；激素实验用无酚红培养基和活性炭处理血清，并常规做 STR 鉴定与支原体检测。

一、细胞复苏

1.【准备工作】完全培养基：MEM改良Eagle培养基（abs9467-500ml/SV30308.01）+10%FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+1%P/S（abs9244-100ml/SV30010），部分激素相关研究补加0.01 mg/mL 的牛胰岛素（abs9169-25mg）或人重组胰岛素Insulin ( UA100016-20mg）；取9mL于37℃预热。水浴锅预热至37℃；生物安全柜紫外照射30min。

2.【融化】从液氮/冰柜中取出冻存管，37℃水浴快速摇晃融化，约1-2min。

3.【重悬】75%酒精擦拭冻存管外壁，安全柜内开盖，将细胞悬液沿管壁缓慢滴入含9mL预热完全培养基的离心管中，轻柔混匀。

4.【离心】300×g离心5min，弃上清，减少DMSO残留。

5.【重悬】加入1-2mL完全培养基轻轻吹打重悬；接种T25培养瓶（4-6mL培养基），十字混匀，标注名称、代次、日期。

6.【培养】放入37℃、5%CO₂培养箱；24-48h贴壁后换液去除死细胞碎片。

二、细胞传代

1.【实验准备】配制完全培养基：MEM改良Eagle培养基（abs9467-500ml/SV30308.01）+10%FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+1%P/S（abs9244-100ml/SV30010）；按需选加牛胰岛素0.01mg/mL（abs9169-25mg）或人重组胰岛素Insulin ( UA100016-20mg）。提前取出PBS（abs962-500ml/SV30305.01）、完全培养基，恢复至室温；生物安全柜提前使用紫外照射30min。

注意：MCF-7需以完全培养基维持激素应答表型，避免频繁更换不同批次血清；建议固定批号,推荐使用优级胎牛血清（abs972-500mL/SV30302.03）。

2.【镜检】融合度70%-80%、细胞铺展饱满、可见圆顶结构时传代；过度融合会停滞生长并改变形态。

3.【细胞清洗】吸弃旧培养基，沿瓶壁缓慢加入2-3mL PBS（abs962-500ml/SV30305.01），轻摇覆盖后吸弃。

4.【细胞消化】加入0.25%胰酶-EDTA（abs47047375-100mL/SH30042.01）覆盖瓶底，37℃消化3-5min（MCF-7贴壁较牢、消化时间略长），镜下见细胞回缩变圆即加等量完全培养基终止。

5.【离心】300×g离心5min，弃上清；加入完全培养基轻轻吹打10-15次重悬。

6.【传代】按1:2-1:4接种至新瓶（MCF-7增殖慢，比例不宜过大），补加完全培养基至工作体积，十字混匀，标注信息。

7.【镜检】镜下确认分散均匀，放入37℃、5%CO2培养箱，48-72h观察。

注意：

（1）消化不足细胞不脱壁，强行吹打会伤细胞；消化过度降低存活，需以镜下脱壁为准，而非固定时长。

（2）接种密度保持30%-60%，融合度过低（<20%）长期生长不良甚至停滞；建议维持70%-90%汇合度传代。

三、细胞冻存

1.【准备工作】冻存液：无血清细胞冻存液（abs9417-100mL）或90% FBS（货号：abs972-500mL/SV30302.03）+10% DMSO（abs9187-100mL）；冻存管标注名称、代次、冻存人、日期；安全柜紫外照射30min。

2.【细胞收集】融合度70%-80%时按传代步骤消化收集，300×g离心后弃上清。

3.【细胞重悬】加入冻存液（约1mL/管）轻柔重悬，细胞密度约1-5×10⁶/mL。

4.【冻存】每管1mL入冻存盒，-80℃过夜后转液氮长期保存；建议冻存低代次（≤15代）以维持ER/PR表型。

四、关键注意事项

1.密度与接触抑制

（1）MCF-7具接触抑制，融合度70%-80%传代最佳，过度融合停止增殖；

（2）接种密度保持30%-60%，过低（<20%）长期生长不良甚至停滞；

（3）培养中出现的“圆顶（domes）”为分化表型，并非污染，无需处理。

2.消化与脱壁

（1）胰酶消化3-5min，贴壁牢固需镜下确认脱壁后再终止；

（2）避免过度吹打，轻柔吹打10-15次重悬即可。

3.支原体与表型维持

（1）MCF-7极易污染支原体，建议每2-3月以PCR或荧光染色法检测；

（2）ER/PR表型随代次与血清批次波动，关键实验使用低代次（≤20代）并验证受体状态。

参考资料

ATCC

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