从批放行到非内毒素热原风险评估中的MAT热原检测
2026-10-29 来源:本站 点击次数:34单核细胞活化反应试验（Monocyte Activation Test，MAT）能够通过模拟人体免疫细胞的活化反应，评估样品的热原性，在产品批放行和NEP风险评估中发挥重要作用。
围绕MAT的应用场景、检测策略及实施要求，以下几个问题值得重点关注。
一、为什么检测了细菌内毒素，还需要关注其他热原？
因为细菌内毒素只是热原的一种，NEP同样可能引起人体发热反应。
细菌内毒素检测法（BET），包括鲎试剂法（LAL）、重组C因子法（rFC）重组级联试剂（rCR），主要用于检测细菌内毒素，无法全面覆盖所有NEP。
NEP来源广泛，例如革兰氏阳性菌产生的脂蛋白、肽聚糖、磷壁酸和脂磷壁酸，以及真菌、酵母等来源的致热性物质。这些热原物质可以通过细胞内外不同受体结合诱发人体致热反应。即使产品的内毒素检测结果符合要求，也不能据此排除所有NEP风险。更需要注意的是，内毒素与NEP同时存在时，还可能产生协同或增强效应，进一步加剧免疫反应。
因此，内毒素检测合格，不等于产品的整体热原风险已经得到充分控制。
二、哪些情况下需要考虑MAT检测？
MAT的应用主要包括两个方面：产品批放行热原检测，以及NEP风险评估。
对于具有固有致热性，或存在接触材料致热原风险的产品，如果需要全面评价内毒素与NEP，可根据产品特性和验证结果，考虑采用MAT开展热原检测。
相关产品包括：
- 发酵类制剂：在发酵过程中，需考虑表达系统类型（原核或真核），对于原核表达系统，还需明确所用细菌为革兰氏阳性菌还是革兰氏阴性菌。此外，需考察培养基成分的来源（合成、动物源或植物源）等，均需充分评估NEP风险引入的可能；
- 疫苗：含有固有致热性或自身携带内毒素的疫苗产品；
- 血液制品：需要综合考虑NEP风险，如静脉注射人免疫球蛋白等；
- 鲎试剂干扰无法排除的样品：若产品本身会抑制或增强鲎试剂反应，通过稀释或前处理无法排除干扰，如抗生素、siRNA产品等；
- 医疗器械： 直接接触循环血液或长期植入/深部组织植入产品；
- LER（低内毒素回收）研究：FDA推荐MAT用于LER缓解方法的开发；
此外，如果产品常规放行采用BET进行内毒素检测，也需要根据相关药典要求评估NEP风险。
需要强调的是，MAT并非所有产品都必须采用的常规检测方法。具体采用MAT进行批放行，还是将其用于补充热原风险评估，应结合产品特性、检测策略、法规要求及产品特异性验证结果确定。
三、欧洲药典对NEP风险评估有什么要求？
欧洲药典第5.1.13章《热原性》对NEP风险评估作出了相关规定。
按照该章节的技术思路，当产品采用BET进行常规放行检测时，需要评估生产过程引入NEP的可能性。欧洲药典推荐采用MAT开展相关风险评估，并结合产品具体情况进行验证。
这意味着，企业不能只关注内毒素检测方法本身是否符合要求，还需要回答一个更完整的问题：
除了细菌内毒素，产品在生产过程中是否可能引入其他致热性物质？现有检测策略能否充分识别相关风险？
对于需要开展NEP风险评估的产品，MAT是重要的体外检测工具。实际应用中仍需结合适用的药典条款、产品特性及验证结果确定具体方案。
四、NEP主要来自哪里？
NEP风险并不一定来自某一个特定环节，而可能贯穿原材料管理、生产环境和整个制造过程。
常见的潜在来源包括：
- 原材料及包装组件：原材料、包装材料等可能引入致热性污染物。
- 生产环境：一般环境、洁净室物料、人员皮肤细菌及空气处理系统等。
- 生产设备与工艺组件：产品制备设备、生产接触组件及相关工艺过程。
- 生物负载及其他生物来源：生产过程中的微生物污染，以及血浆等生物来源物料。
五、什么时候应该开展NEP风险评估？
建议在生产工艺开发阶段就纳入考虑，而不是等到产品申报或上市后再补充。根据欧洲药典相关技术思路，NEP风险评估可在以下阶段开展：
①生产工艺建立期间
在工艺开发过程中，识别原材料、生产环境、设备及工艺组件等潜在风险，并通过适当的热原检测验证风险。
②生产工艺确立后
在产品批放行阶段，结合实际产品和既定工艺，进一步评价NEP风险。
③发生可能影响热原质量的工艺变更时
例如更换原材料、变更生产地点或调整关键工艺参数等，应评估变更对产品热原风险的潜在影响，并根据风险和适用要求开展进一步研究。
将风险评估提前纳入研发与质量体系，有助于减少后期补充研究的压力，也能使热原控制策略与实际生产工艺保持一致。
六、开展MAT检测，需要提前准备哪些工作？
MAT不仅涉及检测操作本身，还需要考虑实验室条件、方法适用性以及产品特异性验证等环节。
对于计划自行建立MAT检测能力的企业，需要评估实验室设施、人员培训、试验可行性、样品储存与物流、方法验证及常规检测能力。
对于暂时没有条件自建平台，或希望加快产品开发与申报进程的企业，也可以考虑委托具有相关经验的MAT检测服务机构。
选择服务机构时，建议重点关注以下方面：
- 检测能力： 是否具备相应的MAT检测与产品特异性验证能力。
- 方法开发与验证： 是否能够根据产品特性开展适用性研究和相关验证。
- 项目实施能力： 是否能够支持研发阶段检测、方法验证及后续批放行需求。
- 数据与申报支持： 检测数据是否完整、可追溯，能否为注册申报提供相应支持。
从热原检测到风险管理
建立更完整的质量控制策略
随着生物制品和复杂制剂不断发展，热原质量控制需要从单一的内毒素检测，进一步关注产品整体致热风险。
MAT既可用于适用产品的体外批放行热原检测，也可用于NEP风险评估。对于具体产品，应结合相关法规要求、产品特性、生产工艺和验证结果，确定合理的检测策略。
湖州申科围绕MAT热原检测需求，可提供相关检测及技术支持，协助企业开展产品热原风险评估、方法建立与验证工作，为产品研发、质量控制及注册申报提供支持。
让热原检测不止于单项结果，更服务于产品全生命周期的质量与安全管理。