亲和层析填料蓝胶的应用领域及案例分享
2024-09-06 来源:博格隆微信公众号 点击次数:1493在生物医药行业中，如果我们首次进入一个下游工艺的实验，一眼望去，可以看到各种各样的填料。这些装在瓶子里或者桶里的填料，有的透亮，有的显示出白色。倘若有一款填料，瓦蓝瓦蓝的，与同类显得格外不同，一定会吸引你的目光。这就是今天本文所介绍主角，一款非常独特的亲和填料——蓝胶。
简单说，蓝胶是用Cibacron Blue 3GA染料分子作为亲和配基的一款神奇的亲和层析填料。这个染料分子天然显示出蓝色，由其制备而成的填料也就显得瓦蓝瓦蓝的，这就赋予了这款填料的一个独特外号“蓝胶”。
蓝胶的应用领域Cibacron Blue 3GA分子属于蒽醌衍生物，分子结构中有氨基、磺酸基和苯基，以其核苷酸特异性、离子和疏水性捕获蛋白质[1]。
一般来说，蓝胶除了可以特异性地结合白蛋白外，也可以结合干扰素及其他血浆蛋白；另外，它对于多种蛋白酶都有着出色的结合效果，包括脱氢酶、激酶、转移酶，以及大多数含腺苷酸的辅酶，例如NAD+。
博格隆供应Blue Bestarose FF、Blue Bestarose HP、Diamond Blue、Diamond Blue Mustang 4款优异的蓝胶产品，技术参数如下表：
+接触时间：4min
• 样品：人血白蛋白
• 层析柱：EzFast，1 mL
• 流速：0.2mL/min
• 结合液：50mM KH2PO4，pH7.0
• 洗脱液：1.5M NaCl，50 mM KH2PO4，pH7.0
Fig. 1 Blue Bestarose FF结合洗脱图谱
应用案例2• 样品：人血上清稀释样 120mL
• 层析柱：EzFast Blue FF 5mL
• 流速：1mL/min
• 平衡：20mM NaH2PO4，pH7.0
• 淋洗：20mM NaH2PO4，0.5M NaCl，pH7.0
• 洗脱：20mM NaH2PO4，2M NaCl，pH7.0
Fig. 2 EzFast Blue FF洗脱产物的毛细管电泳分析图谱[2]
Fig. 3 白蛋白纯化数据分析[2]
如Fig. 3所示，洗脱产物纯度达90%，回收率为49.59%，浓度为12.08mg/mL。
参考资料
[1] Subramanian S. Dye-ligand affinity chromatography: the interaction of Cibacron Blue F3GA with proteins and enzymes. CRC Crit Rev Biochem. 1984;16(2):169-205
[2] 吕兴凯, 王吟, 任科云, 胡尚杰, 何昆, 陈爱芳, 张帆. 毛细管电泳法分析人血白蛋白纯化工艺的有效性[J]. 中国生物制品学杂志, 2020, 33 (12): 1441-1444.