DNA Marker-核酸分子标签原理解析
2025-03-21 来源:本站 点击次数:1309
DNA Marker（DNA标记物）是一种用于核酸电泳的分子量标准工具，通过已知长度的DNA片段帮助研究人员估计样品DNA的大小、浓度及电泳迁移特性。以下是其核心信息：
一、定义与作用
二、类型与规格
三、选择标准
四、应用场景
五、使用注意事项
六、市场代表产品
- 基本定义
DNA Marker由特定分子量的双链DNA片段组成（如100bp、500bp、1kb等），混合含染料的上样缓冲液，用于电泳中作为分子量参照。- 广义：包括可遗传的DNA序列或蛋白质标记。
- 狭义：特指反映基因组差异的特异性DNA片段。
- 核心作用
- 分子量估算：通过对比Marker条带与样品条带的位置，粗略判断目标DNA的大小。
- 浓度检测：利用Marker中高浓度条带（如750bp）的亮度，辅助估算样品浓度。
- 电泳条件优化：根据目标片段大小选择凝胶浓度（如大片段用低浓度琼脂糖，小片段用高浓度）。
- 常见类型
- 预染Marker：含RedView、SYBR Green等染料，可直接电泳观察。
- 非预染Marker：需后续染色，灵敏度更高。
- 梯度Marker：覆盖广泛分子量范围（如1000bp、2000bp），适合多目标分析。
- 规格示例
- 1000bp：含50bp、100bp至1000bp的条带，适用于常规PCR产物分析。
- 12000bp：覆盖12000bp以上大分子DNA，用于质粒完整性检测。
- 目标片段匹配
- 选择Marker中与目标片段大小相邻的密集条带，以提高估算精度。
- 例如：检测500bp片段时，优先选择含400bp、600bp条带的Marker。
- 凝胶浓度适配
- 大片段（>1kb）：使用0.8%-1.0%琼脂糖+1xTAE缓冲液。
- 小片段（<500bp）：使用1.5%-2.0%琼脂糖+0.5xTBE缓冲液。
- 染料类型
- RedView：低毒性，可直接紫外观察，适合常规实验。
- SYBR Green I：灵敏度高，但稳定性较差，需避免长时间电泳。
- 分子生物学实验
- PCR产物分析、质粒构建验证。
- 基因组DNA提取质量检测。
- 医学与临床检测
- 病原体核酸检测（如新冠病毒）中评估扩增效率。
- 遗传病筛查中检测基因突变。
- 工业与科研
- 基因组作图、物种亲缘关系分析。
- 肿瘤标志物检测中的基因表达分析。
- 保存条件
- 常规Marker（含Loading Buffer）：室温可稳定3个月，长期保存需-20℃。
- 预染Marker：避免反复冻融，建议分装后使用。
- 常见问题解决
- 条带模糊：检查DNA降解或电泳电压过高。
- 迁移异常：确认样品是否含高盐或蛋白污染，调整电泳条件。
- Marker丢失：缩短电泳时间（如溴酚蓝迁移至凝胶2/3处停止）。
- 达原辰光DNA Marker：覆盖50bp-12000bp，条带清晰，适合各种应用。
- 诺唯赞DL2000：覆盖100bp-2000bp，适合常规PCR
相关文章
更多 >