图 1. 磁珠的基本结构[5]。
图 2. 磁珠电镜结构图。
磁珠的特点
表 1. 磁珠的特点、应用及优势。
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图 3. 磁珠法核酸分离纯化示意图。
免疫沉淀 (IP)
利用磁珠表面的功能化抗体或配体与目标蛋白或抗原之间的特异性结合,通过施加磁场,可以快速分离结合了目标分子的磁珠,进而实现富集和纯化。具有操作简单、效率高且适用于多种样本类型的特点,广泛应用于蛋白质相互作用研究、信号转导通路分析、抗体-抗原交互作用研究、生物标志物的筛选和验证等。
图 4. 磁珠法免疫沉淀示意图。
免疫共沉淀 (Co-IP)
利用抗体与目标蛋白的特异性结合,将目标蛋白和其相互作用的伴侣蛋白共同沉淀出来。当使用磁珠作为载体时,抗体被固定在磁珠表面。通过结合、洗涤和脱附步骤,可以有效分离并富集这些蛋白质复合物,具有高效性、灵活性、操作便捷的优点,广泛应用于蛋白质相互作用研究、信号转导通路解析、生物标志物筛选、疾病机制研究等。
图 5. 磁珠法免疫共沉淀示意图。
染色质免疫共沉淀 (ChIP)
ChIP 是一种将特定抗体与目标蛋白结合的技术,以富集与其相互作用的 DNA 片段,而使用磁珠作为载体可以提高分离效率和操作方便性,同时具备适应性强的特点,广泛应用于转录因子结合位点的鉴定、染色质修饰状态的研究、基因调控机制的解析、疾病模型中的染色质状态研究等。
图 6. 磁珠法染色质免疫共沉淀示意图。
蛋白纯化
磁珠以其超顺磁性和功能化表面,能够与目标蛋白结合,在应用外部磁场的情况下,结合了目标蛋白的磁珠可以被迅速分离,进而实现蛋白质的富集和纯化。配套磁力架使用,降低了操作的复杂性,减少了对离心设备的依赖,具有高效性,简便性,灵活性的优点,广泛应用于蛋白质生物学研究 (如功能分析、相互作用研究)、药物筛选和开发、蛋白质结构和功能的解析、临床诊断和生物标志物检测等。
以 IP 为例:
1. 样品准备:按照您的实验需求,可选择超声、RIPA 裂解等方案,制备样本,建议样本制备时可添加蛋白酶/激酶等抑制剂 (HY-K0010、HY-K0017 等) 增加蛋白稳定性。
2. 磁珠准备:混匀含有保护液的磁珠,取适量并用平衡液清洗磁珠,利用磁力架进行磁性分离。
3. 磁珠-样品结合:磁珠、样品混合孵育,形成磁珠-样品复合物。
4. 洗杂:清洗磁珠-样品复合物,磁性分离,获得含有目的蛋白的磁珠。
5. 蛋白洗脱:根据下游实验选择合适的洗脱方式。
6. 目的蛋白收集:磁性分离,移取上清液用于后续实验。
7. 蛋白检测:SDS-PAGE、WB 、质谱检测等。
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磁珠配对:如何找到最适合你的“魔法搭档”
基础磁珠
基础磁珠的表面可以是裸露的、羧基化的 (-COOH)、氨基化 (-NH2) 的或其他官能团修饰。
功能磁珠
功能磁珠的表面通常偶联不同的分子使其具有专一功能。
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货号 |
产品名称 |
HY-K0201 |
Anti-HA 磁珠 |
HY-K0201A |
Anti-HA 磁珠 (1 μm) |
HY-K0202 |
蛋白 A/G 磁珠 |
HY-K0203 |
蛋白 A 磁珠 |
HY-K0204 |
蛋白 G 磁珠 |
HY-K0205 |
蛋白 L 磁珠 |
HY-K0206 | Anti-c-Myc 磁珠 |
HY-K0206A | Anti-c-Myc 磁珠 (1 μm) |
HY-K0207 | Anti-Flag 磁珠 |
HY-K0207A | Anti-Flag 磁珠 (1 μm) |
HY-K0208 | 链霉亲和素磁珠 |
HY-K0209 | Anti-His 磁珠 |
HY-K0210 | His 标签纯化凝胶珠 (Ni-NTA) |
HY-K0223 | 羟基磁珠 (200 nm,10 mg/mL) |
HY-K0224 | 氨基磁珠 (200 nm,10 mg/mL) |
HY-K0225 | 羧基磁珠 (200 nm,10 mg/mL) |
HY-K0226 | CHO 磁珠 (200 nm, 10 mg/mL) |
HY-K0227 | NHS 磁珠 (200 nm, 10 mg/mL) |
HY-K0228 | Oligo (dT)30 磁珠 |
HY-K0234 | 谷胱甘肽琼脂糖磁珠 |
HY-K0236 | Anti-Flag 琼脂糖磁珠 |
HY-K0237 | Anti-HA 琼脂糖磁珠 |
HY-K0240 | Ni-IDA 琼脂糖磁珠 |
HY-K0241 | Ni-NTA 琼脂糖磁珠 |
HY-K0242 | 蛋白 A Plus 琼脂糖磁珠 |
HY-K0243 | Anti-GFP 琼脂糖磁珠 |
HY-K0246 | Anti-GFP 琼脂糖磁珠 |
参考文献: