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活细胞成像监控NK细胞:突破传统检测,让细胞监测变成“直播”

2025-02-26     来源:本站     点击次数:414

前言:
自然杀伤(NK)细胞是先天免疫系统的重要组成部分,其无需事先敏化即可识别并消灭恶性或病毒感染细胞。在前临床研究中,NK细胞杀伤实验用于评估NK细胞疗法的效果。这些实验通过将NK细胞与荧光标记的靶细胞共培养,测量靶细胞裂解程度以评估NK细胞活性。然而,传统染料如Calcein-AM的快速泄漏影响了实验的准确性。本研究采用绿色荧光染料CellTracker CMFDA及Celloger® Pro自动活细胞成像系统,改善了检测精度。
 
材料与方法:
靶细胞制备:
  • 使用U-2OS细胞,分三种条件:
    • 稳定表达EGFP标记的H2B;
    • 使用Calcein-AM染色;
    • 使用CellTracker CMFDA染色。
  • 各组细胞在无血清培养基中染色后,于48孔板中以3×10⁴密度接种,并与NK-92效应细胞按不同效应/靶(E:T)比(5:1、10:1、20:1)共培养。
  • 通过4倍物镜的 Celloger® Pro 在24h内每间隔1h采集图像,使用 Celloger® 分析软件对实验结果进行分析,通过红绿荧光强度比值以评估NK细胞毒性。
 
结果:

图 1. NK-92 与表达 GFP:H2B 的 U-2OS 细胞的杀伤试验
(A) NK-92 细胞与表达 GFP:H2B 的 U-2OS 细胞按 5:1、10:1 和 20:1 的不同效应物与靶标(E:T)比例共培养。在 24 小时内,每小时用配备 4 倍镜头的 Celloger® Pro 采集一次图像。(B)图中显示了表达 GFP:H2B 的 U-2OS 细胞在 24 小时内的荧光强度比(红/绿),比较了三种不同的 E:T 比率: 5:1、10:1 和 20:1。

图 2. 用活细胞染色染料对 U-2OS 细胞进行的 NK-92 杀伤试验
(A、B)NK-92 细胞与 U-2OS 细胞共培养,用Calcein-AM(A)或 CellTracker CMFDA(B)染色,效应物与靶标(E:T)的比例分别为 5:1、10:1 和 20:1。在 24 小时内每小时用 Celloger® Pro 4X 采集一次图像。(C)图中显示了 U-2OS 细胞在 24 小时内用Calcein-AM 或 CellTracker CMFDA 染色后的荧光强度比(红/绿),比较了三种不同的 E:T 比率: 5:1、10:1 和 20:1。

图 3. CellTracker CMFDA 和 Calcein-AM 的染色保留比较
(A)比较 CellTracker CMFDA 和 Calcein-AM 在 U-2OS 细胞中 24 小时的染色保留时间的延时图像。(B)图中显示的是归一化绿色荧光强度值,比较了 CellTracker CMFDA 和 Calcein-AM 随时间变化的保留情况。
 
  • 荧光标记细胞: GFP-H2B靶细胞的实验表明,随着E:T比增加,红荧光(死亡细胞)强度上升,绿荧光(活细胞)下降,且细胞聚集增多。
  • 染料比较: CellTracker CMFDA在染料保持性及长时间追踪方面优于Calcein-AM。CMFDA荧光信号稳定超过12小时,避免了Calcein-AM的快速泄漏引起的误差。
  • 优点总结: CellTracker CMFDA具有更高灵活性,适合快速高效的实验设置,而GFP表达细胞系虽精确但制备耗时且成本高。
 
亮点总结
1️⃣ 创新监测方法使用Celloger® Pro自动化活细胞成像系统,结合优化染色试剂,实现更精准的NK细胞毒性分析。
2️⃣ 稳定性对比实验显示CellTracker CMFDA染剂相较传统Calcein-AM染剂,具有更高的细胞内保留率和更低的漏染,确保实验数据的可靠性。
3️⃣ 实时观察Celloger® Pro可直接观测细胞形态变化及死亡过程,为细胞毒性研究提供更深层次的洞察。
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  • 荧光和明场镜头
凭借双色荧光和明场镜头,Celloger® Pro可以拍摄高质量和高分辨率图片。
  • 可更换的物镜
Celloger® Pro为用户提供可更换的物镜,为研究人员的不同需求提供灵活性。有2X,4X和10X的物镜供选择,用户可以自由切换。
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Celloger® Pro 适配多种holder以适用多种不同类型的细胞培养容器,包括孔板、T形瓶、载玻片。
  • Celloger® Pro 应用场景
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