荧光光度计与超微量分光光度计用途比较
2025-03-21 来源:本站 点击次数:322
荧光光度计与超微量分光光度计两者均可实现对DNA、RNA以及蛋白质浓度的定量，但他们之间有什么区别呢？
一、技术原理对比
三、性能参数对比
四、选择建议
一、技术原理对比
- 荧光计
- 原理：基于荧光染料与靶分子（如DNA、RNA、蛋白质）特异性结合的原理，通过激发光激发荧光信号并检测其强度来定量。
- 优势：
- 灵敏度高（最低检测0.1 pg/μl），线性范围广（如dsDNA检测范围0.2–100 ng）。
- 特异性强，避免传统紫外法受杂质（如酚类、盐离子）干扰的问题。
- 超微量分光光度计
- 原理：基于朗伯-比尔定律，通过测量样品在260 nm（DNA/RNA）、280 nm（蛋白质）等波长处的吸光度计算浓度。
- 优势：
- 样品用量极少（最低0.3 μl），支持全波长扫描（如UV-Vis检测）。
- 操作简单，无需额外试剂，可同时检测核酸纯度（A260 /A280，A260 /A230）。
| 技术类型 | 典型应用 | 适用场景 |
|---|---|---|
| 荧光计 | NGS文库构建前定量、稀有样本（如microRNA）检测、转染实验前定量 | 需高精度、低样本消耗的场景，尤其是下游实验成本高或周期长的研究。 |
| 超微量分光光度计 | 常规核酸/蛋白质定量、菌液密度检测、污染物分析（如糖类、苯酚） | 需快速筛查样品浓度或纯度的常规实验，支持多波长扫描（如UV-Vis、荧光）。 |
三、性能参数对比
| 指标 | 荧光计 | 超微量分光光度计 |
|---|---|---|
| 灵敏度 | 0.01ng/μl（DNA） | 0.5 μl样品量，检测上限可达37500 ng/μl（dsDNA） |
| 线性范围 | 0.2–100 ng（dsDNA） | 0.75–37500 ng/μl（dsDNA） |
| 杂质干扰 | 特异性染料避免干扰 | 需通过A260 /A280，A260 /A230比值评估纯度 |
四、选择建议
- 优先选荧光计（达远辰光荧光计）：当样本珍贵（如单细胞测序）、需高灵敏度或下游实验成本高时。
- 优先选超微量分光光度计：常规核酸/蛋白定量、快速筛查或需多波长检测时。
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