引言
多酚是一类广泛存在于植物中的化合物，其物质种类丰富，如茶多酚、水果多酚、可可多酚、姜黄素、花卉及其衍生食品等，根据其结构可分为黄酮类、酚酸类、单宁类以及其他多酚类。由于多酚物质含有多个酚羟基的，而羟基可以参与多种化学反应，如氧化还原反应、金属离子络合等，从而使多酚表现出抗氧化、抗菌、抗炎等多种生物活性。多酚的结构特性以及多种多功能活性，使其广泛应用于化学、材料、生物、医学等诸多领域。随着纺织行业中母粒拉丝、微胶囊等改性技术的发展，近年来，多酚被广泛应用于纤维的改性。改性后的纤维不仅具有更好的吸湿透气性，还兼具多酚的抗菌、抗氧化等保健功能，深受消费者以及企业青睐。
目前，对物质中多酚含量的检测方法主要有两种：一种为高效液相色谱法，其原理是利用不同物质在色谱柱中保留时间和分离效果不同，对多酚进行分离和定量分析，但由于多酚是多种物质的混合物，用高效液相色谱法不仅需购买大批量的多酚标准物质，成本高，同时很难实现分离，不适用实验室测试用；另一种为分光光度法，利用福林酚与多酚中的酚羟基在碱性条件下发生的氧化反应，显蓝色，且在765nm处有最大吸收，通过测试反应溶液的吸光度和溶液浓度的关系，可以测试出样液中总多酚的含量。该方法成本低，适用实验室总多酚含量的测定。
目前多酚的分光光度法主要用于测定茶叶、天然植物原料、植物油等多酚的测定。对于改性纤维中多酚含量的测定，国内暂时没有测试方法，文献也未见报道。为了满足测试需求，本文开发了多酚改性纤维中多酚含量的测试方法。

1.实验部分
1.1仪器
分析天平：精确到0.01g和0.1mg；超声波清洗器：(60±1)℃，超声频率：99kHz。离心机：转速3500r/min；分光光度计，20mm比色皿；真空平行浓缩仪。
1.2试剂
没食子酸标准品（GA），纯度≥98%；甲醇，色谱纯；70%甲醇水溶液，移取30mL的水与70mL的甲醇混匀；碳酸钠（Na2CO3），分析纯；7.5%Na2CO3溶液（质量浓度）：称37.50g碳酸钠（Na2CO3），加适量水溶解，转移至500mL容量瓶中定容至刻度，摇匀（室温下可保存一个月）。福林酚试剂：2mol/L。
1.3没食子酸标准储备液
称取9.5mg（精确到0.1mg）没食子酸标准品，于10mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度线。
1.4没食子酸工作液
用移液管分别移取0mL、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL的没食子酸标准储备溶液于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，浓度分别为0mg/L、9.5mg/L、19.0mg/L、28.5mg/L、47.5mg/L、66.5mg/L中间工作液。
1.5样品处理步骤
取代表性样品，称取1.0g（精确到0.01g）剪碎的试样，加入150mL的70%甲醇水溶液，摇匀湿润，超声提取一定时间后，过滤提取液，于一定的温度低真空下浓缩，浓缩至提取液少于5mL，转移全部的提取液，待显色。
1.6总多酚测定
用移液管分别移取1mL提取试剂（70%甲醇溶液，作空白对照用）、待用测试液（1.5），分别置于15mL的离心管中，加超纯水，使样液在5mL左右，于每个试管分别加入0.25mL的福林酚试剂，摇匀。反应3min后，加入2.5mL的7.5%Na2CO3溶液，加水定容至10mL，摇匀。室温下放置显色60min。显色液经0.45µm滤膜过滤后，用20mm比色皿，在765nm波长条件下用分光光度计测定吸光度。根据没食子酸工作液的吸光度与对应工作溶液的没食子酸浓度，制作标准曲线，用没食子酸的工作曲线作为标准定量样液中总多酚的含量。

2.结果和讨论
2.1萃取溶剂的选择
本试验方法选取2份不同颜色（粉色、紫色）的阳性样品为研究对象，分别考察甲醇、70%甲醇溶液、乙腈、70%乙腈溶液、乙醇、70%乙醇溶液、丙酮等7种提取溶剂对多酚的提取效果。取5g样品，分别用50mL以上试剂超声萃取60min，萃取液经滤膜过滤后，移取5mL样液至透明玻璃管内，氮吹至低于1mL，加入5mL的福林酚和4mL的碳酸钠溶液，用蒸馏水定容至10mL刻度，避光显色60min，测定其吸光度。图1为7种提取溶剂对粉色样品的试验结果。其中1~7分别为甲醇、70%甲醇溶液、乙腈、70%乙腈溶液、乙醇、70%乙醇溶液、丙酮。

图1  7种提取溶剂对粉色样品的试验结果
 
由图1可知，乙腈（3号管）和乙腈水溶液（4号管）提取能力过强，很容易把样品中各种色素提取出来。因分光光度法中，颜色的变化与浓度相关，可以直观地反映出多酚的浓度水平。超强的提取力会干扰分光的测试结果，因此不适合作为本试验的萃取溶剂。通过对剩下5种提取液显色结果测试发现，丙酮（7号管）做试剂空白时，显色颜色与多酚目标物一致，吸光值很大，干扰测试结果。
因此本方法比较了甲醇、70%甲醇溶液以及乙醇和70%乙醇溶液4种溶剂对2种阳性样品的测试影响，图2为测试结果。

从图2可知，通过对比甲醇、70%甲醇溶液、乙醇、70%乙醇溶液4种溶剂对样品的提取效益，发现70%甲醇溶液对样品提取效果较好，因此选择70%甲醇溶液作为本方法的提取溶剂。

2.2显色剂的用量
配制50mg/L的没食子酸工作液，取1mL分别放入8组不同的比色管中，用水稀释约5mL，分别加入福林酚（2mol/L）0.05mL、0.10mL、0.15mL、0.20mL、0.25mL、0.30mL、0.35mL、0.40mL后，反应3min，然后再加入4mL的7.5%碳酸钠溶液，用蒸馏水定容至10mL刻度，避光显色60min，测定其吸光度。试验结果见图3。

由图3可知：随着福林酚用量的增加，吸光度逐渐升高，当福林酚用量为0.25mL时，吸光度最大。但进一步增加福林酚，吸光度有下降的趋势，因此确定本方法2mol/L福林酚溶液的加入量为0.25mL。

2.3碳酸钠的用量
配制50mg/L的没食子酸工作液，分别取1mL放入11组比色管中，加入福林酚试剂0.25mL后，用水稀释约2mL，反应3min，然后分别再加入0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL、4.5mL、5.0mL、5.5mL的7.5%碳酸钠溶液，用蒸馏水定容至10mL刻度，避光显色60min，测定其吸光度。试验结果见图4。

由图4可知：随着Na2CO3用量的增加，吸光度逐渐升高，当Na2CO3用量为2.5mL时，吸光度增加到最大。但进一步增加Na2CO3溶液用量时，吸光度变化幅度不大，最终确定本方法7.5%的Na2CO3溶液的加入量为2.5mL。

2.4显色温度的确定
配制50mg/L的没食子酸工作液，分别取1mL于6种不同的比色管中，加入福林酚试剂0.25mL后，用水稀释约2mL，反应3min，加入2.5mL的Na2CO3溶液，用水定容至刻度后，分别放在6种不同条件中显色，即常温（约25℃）、水浴30℃、水浴40℃、水浴50℃、水浴60℃、水浴70℃。显色结果见图5。

从图5中可看出：在温度范围为25℃到40℃范围内，随着显色温度的升高，相同含量的溶液其吸光度无明显差异，当温度高于40℃时，随着温度逐渐升高，吸光度相应降低；说明温度升高，不利于反应体系的稳定。因此，本方法最终选择常温（约25℃）作为显色条件。

2.5萃取温度的确定
选取4份阳性样品，剪碎后精确取1.0g样品置于反应管中，加入70mL甲醇，拧紧，摇匀后，分别在30℃、40℃、60℃、70℃常用的超声温度下超声。冷却后，转移萃取液于浓缩管中，用减压平行浓缩方式浓缩净干，用1mL甲醇复溶，取样液显色后，用分光光度计测试。结果见图6。

由图6可知：随着萃取温度的升高，4份样品的提取效率均呈现不同程度的增强，且在超声温度为60℃时，提取量最大，因此最终确定本方法萃取温度为60℃。

3.方法学验证
3.1标准工作曲线
分别移取1mL中间工作液于离心管中，加入0.25mL的福林酚，摇匀反应3min，再加2.5mL的碳酸钠溶液，然后用水定容，此时显色液中多酚的浓度分别为0mg/L、0.95mg/L、1.90mg/L、2.85mg/L、4.75mg/L、6.65mg/L，分光光度法测试其吸光度，用线性对浓度和对应的吸光度进行线性拟合，其R2为0.9973，大于0.99，说明方法的线性良好。结果见图7。

3.2检出限
取2个空白样品，按照优化的试验条件进行处理，并对空白样品进行20次测定后，按照标准方程的适用范围评估检出限和定量限，检出限（LOD）可按LOD=3×标准偏差，检出限结果见表1。
从表1可知：计算出来的理论定量限都低于1mg/L，因考虑到在仪器性能以及分析方法的选择上受干扰物质的影响，把1mg/L作为检出限符合方法的要求，本方法最低检出限为10mg/kg。


3.3回收率和精密度
取样品，剪成5mm×5mm试样，称取1.0g（精确到0.01g）剪碎的试样，加入80mL的70%甲醇水溶液，加入一定体积的没食子酸储备液，制得3个不同水平含量（10mg/kg、20mg/kg、50mg/kg）的目标物，每个水平平行制备7个试样，摇匀湿润，超声提取一定时间后，过滤提取液于60℃左右的温度低真空下浓缩提取液少于5mL，转移提取液至带刻度的离心管中，加入一定量的水，使样液在5mL左右，分别加入0.25mL的福林酚试剂，摇匀。反应3min，加入2.5mL的7.5%碳酸钠溶液，加水定容至10mL、摇匀。室温下放置60min。0.45µm膜过滤显液后，用20mm比色皿、在765nm波长条件下用分光光度计测定吸光度。回收率结果见表2。


4.总结
本文建立了分光光度法测量改性纤维中总多酚含量的方法，通过单因素试验，分别对方法的提取条件、显色条件进行了优化，并对方法进行了验证。结果表明，本文测量改性纤维中总多酚含量的方法可以得到良好的测试结果，线性范围良好，R2为0.9973，回收率在83.94%~88.74%，精密度在0.4%~2.4%之间，满足方法学的要求，可用于测定改性纤维中总多酚的含量。但是本方法也有一定的局限性，如本方法测试的是总多酚含量，无 法鉴别物质来源。
文章来源：[1]蔡妙莹,钟雪莲,胡新涛,等.改性纤维中总多酚含量的测定[J].中国纤检,2025,(03):66-69.DOI:10.14162/j.cnki.11-4772/t.2025.03.004。