方案摘要：霉菌和酵母菌总数是衡量牙膏卫生质量的重要指标，一般而言，这些指标数值越高，表明产品的卫生状况越不理想。依据《GB/T 8372 - 2017 牙膏》的规定，牙膏产品需符合以下卫生标准：菌落总数应控制在≤500 CFU/g，霉菌和酵母菌总数应≤100 CFU/g。本方法利用RAYPA培养基自动制备分装仪及自动菌落计数仪达到对培养基的快速制备和对牙膏中霉菌和酵母菌含量的快速检测，为牙膏卫生质量的评估提供高效、准确的技术支持。

 
方案详情：
实验原理牙膏检样经处理后，在特定条件下培养，通过计数每 1g 检样中形成的霉菌和酵母菌总数，可判断牙膏被此类微生物的污染程度及整体卫生状况。本方法基于霉菌和酵母菌的独特形态及培养特性，采用虎红培养基，于 28℃±2℃恒温培养 5 天，使用菌落计数仪对培养基上生长的霉菌和酵母菌菌落进行快速计数。
 
二、实验准备
1、仪器和设备
① 恒温培养箱：28℃±2℃。
② 振荡器。
③ 三角瓶：250 mL。
④ 试管：18 mm×150 mm。
⑤ 灭菌平皿：直径90 mm。
⑥ Pipetty电动移液器：10 mL量程
⑦ 量筒：200 mL。
⑧ 酒精灯。
⑨ 高压灭菌器。
⑩ 恒温水浴箱。
⑪ 自动菌落计数仪SHASHIN KAGAKU，PSF-1100。
⑫ RAYPA培养基自动制备分装仪
 
2、培养基和试剂
① SCDLP液体培养基
② 虎红（孟加拉红）培养基
 
二、操作步骤
1、使用RAYPA培养基自动制备分装仪、自动制备实验所需的培养基，并分装到平皿。
2、样品稀释：用Pipetty电动移液器吸取1:10的检液2 mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1 mL。另取1 mL注入到9 mL SCDLP液体培养基（或经过验证等效或优于SCDLP的稀释液）试管中（注意勿使吸头接触液面），并充分混匀，制成1:100检液，更换吸头，吸取2 mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1 mL。样品至少需进行1:10和1:100稀释，如样品含菌量高，还可再稀释成1:1000，1:10000，……等，每个稀释度都需要更换1个吸头。

 
3、取样品稀释液各2 mL，分别注入2个灭菌平皿内，每皿1 mL，注入融化并冷却至44℃~48℃的虎红培养基，充分摇匀。凝固后，翻转平板，置28℃±2℃培养5 d，观察并记录。同时吸取1 mL空白稀释液加入灭菌空平皿中，加入约15 mL虎红培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置28℃±2℃培养箱内培养5 d，为空白对照。
三、计算方法
1、在自动菌落计数仪上按照表一的数值，设置好条件。
2、使用自动菌落计数仪，快速识别重叠或模糊的菌落，1-3秒出结果后保存，继续识别其它的培养皿，直到所有培养皿计算完毕。
3、计算出每个培养皿上生长的霉菌和酵母菌菌落数后，求出每个稀释度的平均菌落数。
 
四、结果及报告
1、判定结果时，应选取菌落数在5 CFU~50 CFU范围之内的平皿计数，乘以稀释倍数后，即为每g检样中所含的霉菌和酵母菌总数。
2、其他范围内的菌落数报告：
① 首先选取平均菌落数在30~300之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数报告之（见表1中例1）。
② 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30~300之间， 则应求出两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2则以其中稀释度较低的平皿的菌落数报告之（见表1中例2及例3）。
③ 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例4）。
④ 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1例5）。
⑤ 若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，其中一个稀释度大于300，而相邻的另一稀释度小于30时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例6）。
⑥ 若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每g小于10 CFU。
⑦ 菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见表1报告方式栏）。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。


 
3、每g牙膏含霉菌和酵母菌总数以CFU/g表示。