细胞周期的测定方法步骤
2025-07-31 来源:本站 点击次数:7
细胞周期的测定方法多样，包括同位素标记法、流式细胞仪法、基于细胞成像的荧光检测法、BrdU掺入法等。其中，流式细胞仪法因其高效、快速、适合大量样品检测而成为最常用的测定方法。
一、原理
1、细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。
2、单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。
3、测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。
4、BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。
以下是流式细胞仪法的具体步骤：
1. 细胞培养：选择对数生长期的细胞，接种至24孔板或6孔板中，进行所需的处理（如加入药物）。
2. 收集细胞：终止培养后，用胰酶消化细胞，800rpm离心5分钟，收集细胞沉淀，注意保留培养上清中的漂浮细胞。
3. 固定：用70%乙醇溶液固定细胞，可选择4℃或-20℃固定过夜。
4. RNA酶消化和PI染色：用50μg/ml PI和50μg/ml RNA酶的混合液于500μl体系中染色，37℃避光孵育30分钟。
5. 流式检测：使用流式细胞仪在488nm激发波长处检测红色荧光（PE通道），以低速获取细胞数据。
6. 数据分析：采用适当分析软件（如ModFit软件）进行细胞DNA含量分析，根据DNA含量的不同峰来确定细胞处于哪个时期，G0/G1期、S期和G2/M期。
通过这些步骤，可以准确地测定细胞在各个时期的比例，从而了解细胞周期的动态变化。
一、原理
1、细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。
2、单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。
3、测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。
4、BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。
以下是流式细胞仪法的具体步骤：
1. 细胞培养：选择对数生长期的细胞，接种至24孔板或6孔板中，进行所需的处理（如加入药物）。
2. 收集细胞：终止培养后，用胰酶消化细胞，800rpm离心5分钟，收集细胞沉淀，注意保留培养上清中的漂浮细胞。
3. 固定：用70%乙醇溶液固定细胞，可选择4℃或-20℃固定过夜。
4. RNA酶消化和PI染色：用50μg/ml PI和50μg/ml RNA酶的混合液于500μl体系中染色，37℃避光孵育30分钟。
5. 流式检测：使用流式细胞仪在488nm激发波长处检测红色荧光（PE通道），以低速获取细胞数据。
6. 数据分析：采用适当分析软件（如ModFit软件）进行细胞DNA含量分析，根据DNA含量的不同峰来确定细胞处于哪个时期，G0/G1期、S期和G2/M期。
通过这些步骤，可以准确地测定细胞在各个时期的比例，从而了解细胞周期的动态变化。
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