正确稀释Elisa试剂盒样品指南
2025-11-13 来源:本站 点击次数:35
ELISA试剂盒样品的正确稀释是确保实验结果准确性的关键步骤，需根据样本类型和浓度范围选择合适的稀释策略。以下是具体操作要点和原则：
一、稀释前的准备
试剂平衡：将试剂盒和待测样本恢复至室温（通常20-25℃），避免温度差异影响反应。
工具准备：准备标记好的离心管（如S0-S7）和移液枪，确保枪头无污染。
二、标准品稀释步骤
1、复溶标准品：向标准品管中加入1mL标准品稀释液，静置10分钟并轻柔混匀。
2、梯度稀释：取7支离心管，每管加入500μL稀释液。从标准品原液中吸取500μL加入第1管，混匀后依次等倍稀释至第7管，第8管为空白对照。
3、关键操作：每步需充分混匀，避免气泡产生；稀释后标准品需现配现用。
三、样本稀释策略
1、预实验设计：
低浓度样本（如血清）：建议初始稀释梯度为1:2、1:5、1:10。
高浓度样本（如细胞上清）：可尝试1:10、1:50、1:200。
2、优化稀释倍数：通过预实验筛选OD值落在标准曲线线性区（通常为最高浓度50%左右）的稀释倍数，作为“黄金稀释段”。
四、注意事项
1、避免钩状效应：若样本浓度过高（如血清IgG），需高倍稀释（1:100~1:1000）并验证信号是否线性。
2、移液准确性：大比例稀释时使用校准移液器，避免误差。
3、稀释液选择：使用与试剂盒匹配的缓冲液（如含吐温20的PBS），避免基质干扰。
五、常见问题处理
1、稀释不足：信号超出检测上限，需重新稀释。
2、过度稀释：信号接近背景值，建议降低稀释倍数或直接检测。
通过规范操作和梯度优化，可确保样本浓度处于检测范围内，提高实验可靠性。
一、稀释前的准备
试剂平衡：将试剂盒和待测样本恢复至室温（通常20-25℃），避免温度差异影响反应。
工具准备：准备标记好的离心管（如S0-S7）和移液枪，确保枪头无污染。
二、标准品稀释步骤
1、复溶标准品：向标准品管中加入1mL标准品稀释液，静置10分钟并轻柔混匀。
2、梯度稀释：取7支离心管，每管加入500μL稀释液。从标准品原液中吸取500μL加入第1管，混匀后依次等倍稀释至第7管，第8管为空白对照。
3、关键操作：每步需充分混匀，避免气泡产生；稀释后标准品需现配现用。
三、样本稀释策略
1、预实验设计：
低浓度样本（如血清）：建议初始稀释梯度为1:2、1:5、1:10。
高浓度样本（如细胞上清）：可尝试1:10、1:50、1:200。
2、优化稀释倍数：通过预实验筛选OD值落在标准曲线线性区（通常为最高浓度50%左右）的稀释倍数，作为“黄金稀释段”。
四、注意事项
1、避免钩状效应：若样本浓度过高（如血清IgG），需高倍稀释（1:100~1:1000）并验证信号是否线性。
2、移液准确性：大比例稀释时使用校准移液器，避免误差。
3、稀释液选择：使用与试剂盒匹配的缓冲液（如含吐温20的PBS），避免基质干扰。
五、常见问题处理
1、稀释不足：信号超出检测上限，需重新稀释。
2、过度稀释：信号接近背景值，建议降低稀释倍数或直接检测。
通过规范操作和梯度优化，可确保样本浓度处于检测范围内，提高实验可靠性。
相关文章
更多 >