一、阿兹海默症（AD）核心基础
AD 是进行性神经退行性疾病，核心病理特征为大脑皮层与海马区的 β- 淀粉样蛋白（Aβ）沉积形成老年斑、tau 蛋白过度磷酸化形成神经纤维缠结，最终导致神经元凋亡与认知功能衰退。临床分为两类：

• 散发性 AD：占比 90% 以上，发病与年龄（≥65 岁）、高血压、糖尿病、高脂血症等危险因素相关；

·家族性 AD：罕见，由 APP、PS1、PS2 基因突变导致，发病年龄早（<65 岁）且呈家族遗传倾向。
由于临床 AD 患者脑组织样本难以获取，且无法动态观察疾病进展，动物模型成为研究 AD 发病机制、筛选治疗药物、验证干预靶点的核心工具。
 
二、三类常用 AD 动物模型构建方法（小鼠为主）
（一）转基因小鼠模型（模拟家族性 AD）
适用场景：长期机制研究（如 Aβ/tau 代谢机制）、慢性药物干预实验（观察 6 个月以上疗效）。
核心原理：通过基因工程将人类 AD 致病突变基因（APPsw、PS1ΔE9、tauP301L）转入小鼠基因组，使小鼠自发表达突变蛋白，逐步出现 Aβ 沉积、tau 磷酸化及认知障碍，病理进程与人类家族性 AD 高度相似。
1.操作要点
·品系选择：基础款选 APP/PS1 双转基因小鼠（6-8 月龄出现 Aβ 沉积，12 月龄认知障碍明显，成本适中）；进阶款选 3×Tg-AD 小鼠（8-10 月龄同时出现 Aβ 沉积与 tau 缠结，病理全面但成本高）。均需选用 SPF 级小鼠，性别统一（雌性认知更稳定），起始年龄 6-12 周龄。
·饲养管理：温度 22-24℃、湿度 50-60%，12h 光照 / 黑暗循环；饲料无过敏原，饮水无菌；单笼或 2-3 只 / 笼饲养，避免应激（应激加重 Aβ 沉积）。
2.模型验证（建模后 6-12 月龄）
·病理检测：免疫组化（IHC）用 6E10 抗体检测 Aβ 沉积、AT8 抗体检测 tau 磷酸化；Western blot 检测 Aβ1-42、p-tau（Ser396/Ser404）表达，计算 p-tau/tau 比值。
·行为学测试：Morris 水迷宫（成功模型潜伏期延长、目标象限停留时间缩短）、新物体识别实验（成功模型探索新物体比值 < 0.5）、Y 迷宫（成功模型交替率 < 50%）。
3.优缺点
·优点：病理稳定，与人类 AD 相似度高，可长期观察；
·缺点：建模周期长（≥6 个月），成本高（小鼠单价 1000-2000 元 / 只），无法模拟散发性 AD。
（二）Aβ 注射诱导模型（模拟散发性 AD）
适用场景：短期药物干预实验（1-4 周）、急性病理研究（如 Aβ 诱导的神经炎症机制）。
核心原理：将人工合成的 Aβ1-42 寡聚体（毒性最强，易沉积）通过立体定位注射至小鼠海马区，直接诱导局部神经元损伤、小胶质细胞活化，7-14 天出现认知障碍，建模周期短。
1.操作要点
·Aβ 制备：用无水 DMSO 溶解 Aβ1-42 粉末（纯度≥95%），配 10μM 储存液分装冻存（-80℃，≤6 个月）；使用前 37℃孵育 24h 形成毒性寡聚体（避免反复冻融）。
·立体定位注射：1% 戊巴比妥钠（50mg/kg）麻醉小鼠，固定于定位仪；参照脑图谱定位海马坐标（前后囟 - 2.0mm，左右 ±0.8mm，深度 2.0mm）；颅骨钻孔后，每侧海马缓慢注射 2μL Aβ 寡聚体（0.5μL/min），留针 5min 拔针。
·术后护理：腹腔注射青霉素（5 万 U / 只）2 天预防感染，单笼饲养，观察苏醒情况，术后 3 天避免应激。
2.模型验证（建模后 1-4 周）
·病理检测：注射后 21 天取脑，IHC 检测海马区 Aβ 沉积（6E10 染色）、小胶质细胞活化（Iba-1 染色，成功模型阳性细胞增 2-3 倍）。
·行为学测试：建模后 14 天做 Morris 水迷宫，与假手术组对比，建模组潜伏期延长≥50% 为成功。
3.优缺点
·优点：建模周期短（2 周），成本低（ICR 小鼠 20-30 元 / 只），可模拟散发性 AD 急性病理；
·缺点：病理局限于海马区，无法模拟 AD 进行性发展，不适合长期机制研究。
（三）D - 半乳糖 + AlCl₃联合诱导模型（模拟 AD 早期）
适用场景：AD 预防药物研究（如抗氧化剂筛选）、环境因素（如铝暴露）相关机制研究。
核心原理：D - 半乳糖导致氧化应激（ROS↑、SOD↓），Al³⁺抑制 Aβ 降解酶并促进 Aβ 沉积，二者联合模拟 AD 早期认知衰退与氧化损伤，病理温和。
1.操作要点
·试剂配制：D - 半乳糖用生理盐水配 5% 浓度（现配现用）；AlCl₃配 0.2mol/L 浓度，调 pH 至 7.2（避免损伤腹腔），4℃保存≤1 周。
·给药方式：腹腔注射 D - 半乳糖（120mg/kg）+ AlCl₃（40mg/kg），每天 1 次，连续 42 天；对照组注射等体积生理盐水。
2.模型验证（建模 6 周后）
·氧化应激指标：检测血清 / 脑组织 SOD 活性（成功模型↓30%-40%）、MDA 含量（成功模型↑50%-60%）。
·行为学测试：新物体识别实验（成功模型探索新物体比值 < 0.45）、避暗实验（成功模型错误次数↑2-3 倍）。
·病理检测：HE 染色观察海马神经元，成功模型神经元数量↓20%-30%，排列紊乱。
3.优缺点
·优点：操作简单（无需定位仪），成本极低，适合大规模药物筛选；
·缺点：病理轻微（无明显 Aβ/tau 异常），与人类 AD 相似度低，不适合机制研究。
 
三、模型构建关键注意事项（避坑指南）
1.模型选择原则：长期机制研究（≥6 个月）选转基因模型，短期药物干预（1-4 周）选 Aβ 注射模型，抗氧化研究选 D - 半乳糖 + AlCl₃模型。
2.样本量与操作规范：每组至少 8-10 只小鼠（满足方差分析）；转基因小鼠每 3 代换种鼠（防基因漂移），定期 PCR 验证基因型；Aβ 注射严格控孵育时间与坐标误差；腹腔注射时针头斜面朝上（30°-45°），避免刺伤内脏。
3.对照设置：需含空白对照（正常小鼠）、阴性对照（对应模型的生理盐水 / 野生型对照）；可选阳性对照（多奈哌齐 1mg/kg/d 处理的模型小鼠），验证实验体系有效性。