胰岛素ELISA试剂盒的操作步骤讲述
2025-12-03 来源:本站 点击次数:27
胰岛素ELISA试剂盒是一种高灵敏度、高特异性的免疫学检测工具，用于定量测定血清、血浆、细胞上清等样本中的胰岛素含量。它在糖尿病研究、动物模型评估及代谢疾病机制探索中具有重要应用价值。
尽管不同厂家提供的说明书存在细微差别，如加样顺序、孵育时间或稀释倍数，但整体遵循相同的酶联免疫吸附测定（ELISA）逻辑。
胰岛素ELISA试剂盒操作步骤
1、样本准备
血清/血浆样本需离心（2000-3000转/分，20分钟）去除沉淀，避免溶血或高血脂样本。
若样本浓度过高，需用稀释液预实验确定稀释倍数。
2、试剂准备
将试剂盒及样本恢复至室温（20-25℃）。
浓缩洗涤液按1:20稀释，标准品梯度稀释（如40→1.25 mIU/L）。
3、加样与孵育
每孔加入50μL标准品或样本，50μL酶标抗体（一步法）。
37℃孵育60分钟，振荡500转/分钟。
4、洗涤与显色
洗板5次，拍干后每孔加90μL底物TMB。
37℃避光孵育15分钟，观察颜色变化。
5、终止与检测
每孔加50μL终止液，立即用酶标仪测450nm吸光度。
根据标准曲线计算样本浓度。
总结要点：
胰岛素ELISA试剂盒的操作需严格遵循说明书，重点控制温育时间、洗涤彻底性与加样精度。实验成功的关键在于：
1.所有试剂恢复至室温再使用；
2.使用排枪加样以减少误差；
3.显色后及时读数；
4.每次实验均构建标准曲线并做复孔。
5.若样本浓度过高，应预先稀释后再检测，结果乘以总稀释倍数获得实际浓度。
尽管不同厂家提供的说明书存在细微差别，如加样顺序、孵育时间或稀释倍数，但整体遵循相同的酶联免疫吸附测定（ELISA）逻辑。
胰岛素ELISA试剂盒操作步骤
1、样本准备
血清/血浆样本需离心（2000-3000转/分，20分钟）去除沉淀，避免溶血或高血脂样本。
若样本浓度过高，需用稀释液预实验确定稀释倍数。
2、试剂准备
将试剂盒及样本恢复至室温（20-25℃）。
浓缩洗涤液按1:20稀释，标准品梯度稀释（如40→1.25 mIU/L）。
3、加样与孵育
每孔加入50μL标准品或样本，50μL酶标抗体（一步法）。
37℃孵育60分钟，振荡500转/分钟。
4、洗涤与显色
洗板5次，拍干后每孔加90μL底物TMB。
37℃避光孵育15分钟，观察颜色变化。
5、终止与检测
每孔加50μL终止液，立即用酶标仪测450nm吸光度。
根据标准曲线计算样本浓度。
总结要点：
胰岛素ELISA试剂盒的操作需严格遵循说明书，重点控制温育时间、洗涤彻底性与加样精度。实验成功的关键在于：
1.所有试剂恢复至室温再使用；
2.使用排枪加样以减少误差；
3.显色后及时读数；
4.每次实验均构建标准曲线并做复孔。
5.若样本浓度过高，应预先稀释后再检测，结果乘以总稀释倍数获得实际浓度。
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