外泌体作为细胞间通讯的重要媒介，近年来在疾病诊断、治疗监测和药物递送等领域展现出巨大潜力。然而，由于其纳米级的尺寸、复杂的生物来源以及异质性，如何精准、可靠地检测和鉴定外泌体已成为科研工作者面临的首要挑战。对这一挑战的有效应对，是确保后续研究结论科学性与可靠性的基石。

外泌体是什么？
外泌体是直径30-200纳米的细胞外囊泡，由细胞主动分泌。它们广泛存在于血液、唾液、尿液等多种体液中，作为细胞间的“信使”，能够携带蛋白质、核酸等多种生物活性分子，参与细胞通讯、调控生理与病理过程。凭借其丰富的分子信息，外泌体已成为疾病诊断与药物递送领域的重要研究对象。

外泌体结构示意图（图片来源于网络）

外泌体WB鉴定的必要性
一个完整的外泌体鉴定通常遵循《MISEV2018指南》，需要多技术联用：电镜观察形态；NTA提供粒径分布；除此之外还涉及WB技术，通过其抗原-抗体特异性结合原理，在外泌体鉴定起到以下三方面作用：

确认身份：检测外泌体阳性标志蛋白（如CD63、CD9、CD81、TSG101、Alix等），证实所提取的囊泡确实是目标外泌体群体。

评估纯度：检测阴性标志蛋白（如Calnexin、GM130等细胞器蛋白），评估样品是否被细胞碎片、蛋白质聚合物等污染物所污染。

保证可信度：WB鉴定是连接物理表征（电镜、NTA）与功能研究（如细胞实验、组学分析）的桥梁。未经WB验证纯度的外泌体进行后续实验，其结果的可靠性和可重复性将大打折扣。

外泌体WB鉴定难点

外泌体的WB鉴定本身面临诸多技术挑战，主要包括：

标志物选择的复杂性：外泌体具有高度异质性，不同细胞来源的外泌体表面标志物表达量可能存在差异，需根据研究背景选择合适的标志物组合。

样品量少且富集困难：外泌体数量通常较少，蛋白含量低，难以获取足够量的蛋白进行WB检测。即使经过浓缩或富集处理，仍可能因样本浓度过低导致信号弱或无法检测到目标蛋白。

对检测灵敏度要求极高：由于上样量低，需要高灵敏度的检测方法来捕获微弱的信号。

ONEblot Pro近场高感光化学发光成像仪

面对外泌体WB鉴定的高灵敏度需求，ONEblot Pro近场高感光化学发光成像仪提供了创新性的解决方案：

超高灵敏度：采用近场光学原理和优化的光学设计，能够检测到极低丰度的蛋白信号，完美应对外泌体样品量少、靶标蛋白浓度低的难题。

卓越的信噪比：其成像技术能有效降低背景噪音，保证目标条带清晰的信号，确保结果的准确性和可靠性。

操作简便与快速成像：一键3图，简化了传统化学发光的繁琐步骤，能快速获得高质量的数据，大大提升实验效率和重复性。

广泛的动态范围：能够同时准确检测强信号和弱信号，避免信号饱和或丢失，适用于外泌体样品中不同丰度蛋白的同步分析。

彩色Marker精准速判：真色彩彩虹Marker成像，分子量辨识直观高效，尤其有助于对外泌体样品中的多种目标蛋白进行快速、准确的分子量确定。

综上所述，Western Blot通过提供关键的分子证据，是外泌体鉴定与质控的核心环节。面对其严苛的灵敏度与信噪比要求，采用ONEblot Pro等高灵敏度成像技术，可精准锁定目标信号，为数据的可靠性与可重复性提供坚实保障，从而推动外泌体基础研究与临床应用领域的稳健发展。