脑定位注射，相比其他注射方式靶向性强，注射病毒体积小，但是侵入性也强，且对操作者具有很高的要求。在立体定位手术时，颅骨上常用的注射参照点是前囟， 也就是中矢状冠状缝的交叉点（右下图 B 中的十字交叉点）。具体操作步骤如下：

1. 实验动物称重，进行麻醉；

2. 待实验动物完全麻醉后，用剃毛器将动物头顶眼睛至耳朵之间的毛发剃除干净；

3. 将麻醉后的实验动物固定于脑立体定位仪上；

具体操作为：实验动物眼部涂抹青霉素眼药膏以保护其双眼；将门齿挂在门齿挂钩上，确保头部保持固定；检查左右耳杆是否在同一水平上，将左右耳杆通过外耳道插入实验动物耳内。实验动物固定好的标准为：鼻对正中， 头部不动，提尾不掉，目测大脑放置水平；

4. 手术：用碘伏 / 无色葡萄糖氯己定溶液对实验动物头皮进行消毒清理，用手术刀沿中间位置剪开头皮，用镊子对表面的结缔组织进行清理，暴露实验动物的颅骨表面；然后进行调平，首先找到前囟这个坐标，并将其归零， 然后向左右调平，使左右两侧处于同一水平，调整前后囟，使前后囟也在同一水平；

5. 病毒注射：通过查询实验动物的脑立体定位图谱确定待注射脑区的位置（下方图片是大鼠和小鼠的脑谱），并确定其坐标值，即 ML 值（X 轴）、AP 值（Y 轴）、DV 值（Z 轴）；根据目标脑区设定好坐标，移开注射针，用颅骨钻开窗(由于颅骨薄,故务必注意颅骨钻的力度！！),操作时避免伤及脑组织；微量注射器吸取病毒液，随后固定在定位仪上，根据设好的坐标进行病毒注射，注射速度控制在 0.1-0.15μL/min，注射剂量视具体实验而定。注射完毕，留针 10min，以便病毒液充分吸收，然后慢慢回针；

6. 缝合头皮并消毒 , 完成脑定位注射 ; 将动物从脑立体定位仪取下 , 回笼待苏醒 ; 动物苏醒后 , 正常喂养 , 病毒注射后 2-4 周可检测转基因的表达。

提示：若手术麻醉时间较长，建议不要用酒精消毒，防止酒精挥发导致动物体温过低而死亡。手术过程和苏醒过程注意保暖。

脑立体定位注射示意图