核心研究方法
在实验方面，本研究结合了单细胞测序（scRNA-seq）、单细胞TCR/BCR测序（scTCR/BCR-seq）、空间转录组（10x Genomics Visium HD）、多重免疫荧光（mIF）及体内外功能实验等多种技术，采用“临床样本检测→单细胞解析→分子机制验证→体内外功能验证”的研究思路。

文章详解
1. 研究设计与样本特征
研究纳入28例来自上海瑞金医院的晚期PDAC患者，均接受AG化疗，无既往化疗或靶向治疗史。采集36份肿瘤活检样本（23份化疗前、13份化疗后，含8对匹配样本）和24份配对PBMC样本，通过RECIST 1.1标准评估化疗疗效：11例（39.3%）为响应者（部分缓解PR），13例（46.4%）为非响应者（疾病进展PD），4例（14.3%）为稳定疾病（SD）。

研究设计与样本特征

2. 化疗对TME的动态重塑
通过单细胞测序共鉴定出19种主要细胞类型（包括肿瘤细胞、免疫细胞、基质细胞等），共120,353个肿瘤细胞和174,141个PBMC细胞。核心发现：① 响应者化疗后，恶性细胞和巨噬细胞比例显著下降，经典树突状细胞（cDCs）比例升高；② 非响应者化疗后，T/NK细胞比例显著下降，中性粒细胞比例升高；③ 外周血中，响应者和非响应者的增殖性T细胞比例均升高，提示化疗可广泛激活外周T细胞，但T细胞的功能分化存在差异。
 

PDAC 化疗后配对活检中 TME 重塑的特征分析

3. 肿瘤细胞可塑性与化疗响应的关联
鉴定出6种肿瘤细胞亚群：3种经典型（FABP1⁺、SPINK4⁺、GPX2⁺）、1种基底样型（SNCG⁺）、1种增殖型（MKI67⁺）、1种中间共表达型（LMO7⁺）。核心发现：① RNA velocity分析显示，LMO7⁺中间型细胞可双向转换为经典型或基底样型；② 化疗前，响应者中GPX2⁺经典型细胞比例更高，非响应者中SNCG⁺基底样型细胞比例更高；③ 化疗后，响应者肿瘤细胞向经典型转换，非响应者向基底样型转换，且非响应者的恶性细胞总数增加144.01%，响应者减少至预处理水平的28.16%

化疗疗效相关的恶性细胞转化

4. 巨噬细胞亚型与化疗耐药的关联
鉴定出6种巨噬细胞亚型（IL1B⁺、ISG15⁺、MARCO⁺、SPP1⁺、FOLR2⁺、ALDH1A1⁺），其中SPP1⁺ TAMs与化疗耐药密切相关，FOLR2⁺ Trms与化疗敏感相关。核心发现：① 与正常胰腺组织相比，PDAC组织中SPP1⁺ TAMs增多、FOLR2⁺ Trms减少；② 化疗后，响应者中FOLR2⁺ Trms显著增加、SPP1⁺ TAMs减少，非响应者则维持高比例SPP1⁺ TAMs；③ 配体-受体分析显示，SPP1⁺ TAMs与SNCG⁺基底样细胞通过MMP9-CDH1、VEGFA-AXL等通路相互作用，促进耐药；FOLR2⁺ Trms与GPX2⁺经典型细胞通过TNF-TNFRSF21等通路相互作用，增强化疗敏感性。
 

巨噬细胞亚型与化疗耐药的关联

5. CD8⁺ T细胞耗竭与化疗耐药的关联
鉴定出多种CD8⁺ T细胞亚群，包括耗竭型T细胞（Tex，分为GZMK⁺过渡耗竭型和终末耗竭型）、组织驻留记忆T细胞（Trm）、终末分化效应记忆T细胞（Temra）等。核心发现：① 化疗后，非响应者中GZMK⁺过渡耗竭型T细胞、终末耗竭型T细胞比例显著升高，响应者中Trm和Temra比例升高；② 响应者的Temra细胞出现克隆扩增，且新增T细胞克隆以细胞毒性Temra为主，提示化疗可诱导新的抗肿瘤T细胞应答；③ 非响应者中，CD8⁺ T细胞的耗竭评分升高、细胞毒性评分降低，且GZMK⁺过渡耗竭型T细胞可能成为免疫检查点阻断（ICB）的潜在靶点。

CD8⁺ T细胞耗竭与化疗耐药的关联

6. CD276/B7-H3的双重调控作用及靶向价值
CD276/B7-H3在SNCG⁺基底样细胞和LMO7⁺中间型细胞中高表达，且在非响应者中表达显著高于响应者，化疗后表达进一步升高。核心发现：① 体内外实验证实，敲低/敲除CD276可促进肿瘤细胞向经典型转换，抑制基底样型标志物表达；② 靶向CD276可增强CD8⁺ T细胞的细胞毒性，减少T细胞耗竭，降低SPP1⁺ TAMs的血管生成能力；③ 动物实验中，CD276抑制剂联合AG化疗可显著抑制肿瘤生长，延长KPC小鼠的生存期，且无明显毒性。

靶向治疗 PDAC 中CD276/B7-H3逆转化疗耐药性

研究结论
本研究通过单细胞测序等技术，首次揭示了PDAC化疗过程中肿瘤细胞可塑性与TME重塑的动态规律，明确了“SPP1⁺ TAMs-SNCG⁺基底样细胞-耗竭型T细胞”构成的化疗耐药微环境，证实CD276/B7-H3是调控这一微环境的关键分子，为晚期PDAC的化疗联合靶向治疗提供了全新靶点和理论依据。

参考文献：
【1】Zhang Y, Du Y, Wang J., et al. Single-Cell Analysis of Chemotherapy-induced Remodeling Reveals CD276-driven Basal-like Chemoresistance in Pancreatic Cancer. Gastroenterology. 2026 Feb 17:S0016-5085(25)06097-4. doi: 10.1053/j.gastro.2025.09.04