组织脱水的本质，是使用脱水剂逐步置换组织内部水分，为后续有机溶剂渗透与石蜡浸入创造条件，脱水是否充分，直接决定透明效果与最终切片质量。很多操作者习惯将脱水效果完全依赖高浓度酒精，却低估了低浓度酒精的关键作用。事实上，75%–80% 酒精穿透力最强，能在短时间内置换出组织中大量水分；若组织固定不完全，直接进入高浓度酒精易造成表面蛋白质快速凝固，形成一层致密硬壳，阻碍酒精向组织内部渗透，最终导致中心脱水不足。

高浓度酒精的核心作用，只是补脱低浓度阶段未除尽的少量水分。若脱水环节温度过高（超过 35–50℃）、使用丙酮等强脱水剂，或梯度设置不合理，均可能造成组织过度收缩、变硬、变脆，直接影响切片。

组织脱水导致发脆通常有三类原因：一是固定不充分，酒精在脱水同时起到二次固定作用，导致组织质地改变；二是组织本身特性所致，如小动物肝脏等疏松组织，若切片温度过低也易表现偏脆；三是假性变脆，本质是脱水不足，浸蜡阶段石蜡无法进入组织内部，组织在高温下近似 “干烤”，表现为切片呈粉末状、丝状，子宫肌瘤等坚韧组织会出现棱状裂痕甚至整块崩裂；严重脱水不足的组织，中心部位会发软，甚至仍残留水分。

脱水的核心要点，在于低浓度与高浓度酒精的时间合理搭配。低浓度酒精能减少组织收缩，让切片更易切；高浓度酒精保证脱水。常规标本在 35℃条件下，推荐参考时间为：75% 酒精 1.5 小时、85% 酒精 2 小时、95% 酒精（两道）各 1.5–2 小时、无水乙醇（两道）各 1.5–2 小时。小标本与大标本脱水时长差异不大，一般无需单独设置程序；小标本发脆多因包埋纸过厚、组织粘连导致脱水不充分，若时间紧张可适当缩短整体时长。

脱水效率还受室温、组织厚度、类型及固定程度影响。实践表明，室温约 15℃可作为临界参考点：高于此温度可适当缩短脱水时间，低于此温度则适当延长。从质控规范化角度，应尽量稳定温度、浓度、时间三大变量，全年保持 35℃恒温为最佳，有条件的实验室建议配备全封闭自动脱水机。

脱水试剂更换应以处理量为依据，而非简单循环递用。经验上，500ml 试剂每处理约 500 个蜡块即需更换。不推荐所有试剂逐级回退的方式，因为会破坏梯度浓度，导致低浓度酒精偏高。正确做法是：85% 酒精不回退至 75%、95% 酒精不回退至 85%、无水乙醇不直接回退至 95%；仅允许第二道 95% 回退至道 95%、第二道无水乙醇回退至道无水乙醇。若确需将无水乙醇回退至 95% 酒精，需用比重计测量浓度，按需加水或纯酒精校正，严格保证各梯度真实有效。

常规切片脱水的核心原则：在最短时间内实现组织脱水，收缩与硬度适中，切片平整易切、无碎裂、无空洞。

透明的目的，是通过一种既能与脱水剂互溶、又能与石蜡相溶的媒介试剂，置换组织内脱水剂，为石蜡充分浸入打通路径，这一过程称为透明。目前临床最常用、效果最稳定的透明剂仍为二甲苯。

不少人认为二甲苯易导致组织发脆，这一观点并不完全准确。在组织固定充分、脱水的前提下，二甲苯并不会造成组织发脆；相反，对子宫肌瘤等质地偏韧的组织，充分透明反而能让组织更易切片。所谓 “发脆”，多是浸蜡充分后组织恢复原有质地，再加上蜡块冷冻过强所致，若改用冰水或常温切片，脆化现象会明显减轻。

常规透明推荐使用两道二甲苯，每道 30–60 分钟，时间充足可适当延长，透明越充分，浸蜡效果越好。只有当组织内部残留微量水分时，二甲苯在高温下快速带水，才可能造成组织干烤、变硬，因此透明的前提依然是脱水到位。