随着水产养殖、生物医学以及环境毒理学研究的发展，“鱼类细胞培养（Fish Cell Culture）”已成为现代水产生物学研究的重要实验平台。鱼类细胞系在病毒感染机制研究、环境毒理检测以及基因功能研究中发挥着重要作用。

在细胞实验过程中，细胞数量和细胞活率的准确测定是实验成功的重要基础步骤。然而，由于鱼类细胞在形态学特征和培养条件方面与哺乳动物细胞存在明显差异，传统人工计数方法往往存在效率低、重复性差等问题。
 

本文结合鱼类细胞研究背景与真实细胞系案例，介绍EVE™ PLUS超快速明场细胞计数仪在鱼类细胞计数中的应用价值。
 

鱼类细胞研究背景
鱼类细胞培养技术的发展始于20世纪60年代，目前已经建立了数百种稳定鱼类细胞系，涵盖多种鱼类组织来源，包括鳃、肝、肾、肌肉、胚胎及性腺组织。

其中较为常用的鱼类细胞系包括：

例如，RTG-2细胞系来源于虹鳟（Oncorhynchus mykiss）性腺组织，是鱼类细胞研究中应用最广泛的细胞系之一，具有典型的成纤维细胞样形态并能够支持多种鱼类病毒复制，因此常用于病毒学及环境毒理研究。  

此外，斑马鱼模型在生物医学研究中也具有重要价值。研究表明，斑马鱼约70%的人类基因具有同源性，因此其细胞模型广泛用于疾病机制研究与药物筛选。
 

鱼类细胞显微图示例
1. RTG-2虹鳟细胞显微图

RTG-2细胞通常呈现梭形纤维样形态，细胞贴壁生长并形成单层结构，是水产毒理学和病毒学研究的重要细胞模型。

2. 典型鱼类细胞显微形态

不同鱼类细胞系在显微镜下表现出不同形态，例如：

● 成纤维样细胞

● 上皮样细胞

● 病毒感染后的细胞病变（CPE）
 

鱼类细胞计数实验的主要难点
与哺乳动物细胞相比，鱼类细胞在形态和培养条件方面具有明显差异，这些因素增加了细胞计数的难度。

1细胞形态差异明显

鱼类细胞系通常呈现：

● 成纤维样细胞

● 上皮样细胞

● 混合型细胞群

例如RTG-2细胞表现为长梭形纤维样细胞形态，细胞表面结构较为平滑，并具有明显的细胞突起。  

2.细胞团聚与碎片影响计数

鱼类细胞在培养过程中常出现：

● 细胞团聚

● 细胞碎片

● 死亡细胞

这些因素会增加人工血球计数板的识别难度，从而影响计数准确性。
 

3. 低温培养导致细胞状态变化

鱼类细胞通常在18–28°C条件下培养，低温培养会导致：

● 细胞生长速度较慢

● 细胞形态变化明显

● 细胞周期不均一

因此在实验过程中需要同时监测细胞数量与细胞活率。

 

EVE™ PLUS超快速明场

细胞计数仪的技术优势

EVE™ PLUS自动细胞计数仪基于明场显微成像与智能图像识别算法，能够快速完成细胞计数与活率分析。
快速 简单 准确

1. 超快速细胞计数
自动图像采集与分析系统能够在 1 秒内完成细胞计数与活率计算，显著提升实验效率。

2. 明场图像识别技术
通过高分辨率成像系统，仪器能够自动识别：细胞轮廓、细胞碎片、杂质颗粒，从而提高计数准确性。

3. 自动细胞活率分析
结合台盼蓝染色（Trypan Blue staining，0.4%）或赤藓红 B（Erythrosin B ，0.05%），仪器可自动区分：活细胞、死细胞

并输出：活/死细胞数量、细胞浓度、细胞尺寸、总细胞数、细胞活率
 

真实应用案例

1案例1：RTG-2细胞毒理实验
在纳米材料毒性研究中，研究人员使用RTG-2细胞评估纳米材料对鱼类细胞的毒性。研究发现，在24小时暴露实验中，TiO₂-MWCNT纳米材料在100 mg/L浓度下未表现出明显细胞毒性。  

在实验过程中，研究人员需要通过细胞计数确保：

● 实验起始细胞密度一致

● 毒性评价数据可重复

2案例2：环境基因毒性检测

研究表明，通过RTG-2细胞开展“彗星实验（Comet assay）”能够有效检测环境污染物诱导的DNA损伤，为水环境污染评价提供重要工具。

在此类实验中，细胞数量和活率的准确测定对于实验结果的可靠性至关重要。
 

鱼类细胞计数实验流程（示例Protocol）

使用EVE™ PLUS自动细胞计数仪进行鱼类细胞计数的标准流程如下：

细胞收集

使用Trypsin-EDTA消化细胞，轻轻吹打形成单细胞悬液；

细胞染色

取10 μL细胞悬液和 10 μL台盼蓝/10 µL 赤藓红 B染液混合；

混液上样

室温孵育约1分钟，将10 μL混合液加入EVE专用细胞计数板；

自动分析

将计数板插入EVE™ PLUS设备，系统自动完成图像采集、细胞识别、活死细胞区分和细胞浓度计算，整个分析过程约10秒完成；

数据输出

仪器自动生成“细胞浓度、活细胞数量、死细胞数量、细胞活率”等数据，同时保存细胞图像用于实验记录。

随着水产生物学与环境毒理学研究的快速发展，鱼类细胞模型在病毒学研究、毒性评价和基因功能研究中的应用日益广泛。由于鱼类细胞在形态和培养条件上的特殊性，传统人工细胞计数方法已难以满足现代实验需求。

基于图像识别技术的自动化细胞计数设备，如EVE™ PLUS超快速明场细胞计数仪，能够实现快速、准确和标准化的细胞计数与活率分析，为鱼类细胞研究提供高效可靠的技术支持。