ArrayJet芯片点样仪在磷酸化蛋白表达检测实验中的应用
2026-06-22 来源:微信公众号 点击次数:20
慢性B淋巴细胞白血病（B-CLL）是最常见的血液癌症，具有高度的基因组异质性，目前研究多集中在基因组和转录组水平，对蛋白质组，尤其是蛋白磷酸化修饰的功能及影响了解甚微。
蛋白磷酸化是调控细胞信号的关键翻译后修饰，与 CLL 的信号通路密切相关，如 B 细胞抗原受体（BCR）的 tonic 信号传导（低水平持续激活）在 CLL 发展中起关键作用，涉及 LYN、SYK 等酪氨酸激酶。现有治疗如 BTK 抑制剂（伊布替尼）和 BCL-2 抑制剂（维奈托克）虽有效，但存在耐药性和自身微环境影响等问题，且缺乏早期诊断和个性化治疗的生物标志物。整合蛋白质芯片和质谱等高通量筛选技术为分析蛋白质组的磷酸化提供了可能。
文章题目为“Tonic signaling of the B-cell antigen-specific receptor is a common functional hallmark in chronic lymphocytic leukemia cell phosphoproteomes at early disease stages”于2025年3月发表在Molecular Oncology杂志，作者来自西班牙萨拉曼卡大学肿瘤研究中心。
在本研究中，研究对象为 19 例CLL样患者（18 例 B-CLL 和 1 例 CLL ）。首先采集外周血（PB），通过流式细胞仪纯化 CD19⁺、CD5⁺的肿瘤 B 细胞，纯度 > 98%，冻存于液氮中备用。然后使用含尿素的裂解缓冲液（尿素、磷酸酶抑制剂等）裂解细胞，超声处理后离心收集上清液，并测定蛋白浓度。通过磷酸酪氨酸抗体免疫亲和法富集磷酸肽，使用质谱仪分析总蛋白和磷酸化肽段。蛋白组分析检测到 13504 个独特肽段，对应 2970 个蛋白质，其中 28 个为新发现蛋白；蛋白磷酸化分析鉴定到 594 个磷酸肽段，对应 316 个磷酸化蛋白，包括 55 个新发现磷酸肽段。
随后，使用英国ArrayJet微阵列生物芯片点样仪制备蛋白质芯片，检测磷酸化蛋白表达。将 208 种抗体（靶向 162 种蛋白）点印在氨基修饰的玻片上，随后孵育生物素标记的蛋白以及Cy5标记的链霉亲和素， 杂交后使用微阵列荧光芯片扫描仪进行荧光信号分析。
研究发现在2160个共表达蛋白中，有10%（220 个）发生了磷酸化，其主要参与 B 细胞激活和信号转导；发现了BCR的 tonic 信号传导和 NF-κB/STAT3 通路是CLL和 MBL 磷酸化组的共同特征。55 个新磷酸肽的发现扩展了 CLL 磷酸化组数据库，为机制研究提供了可能的潜在靶点，并发现9个磷酸化蛋白（如 BTK、SYK）与早期疾病阶段高度相关，可用于预后评估和治疗监测。整合多组学技术（质谱、蛋白质高通量筛选芯片），提供了CLL蛋白质组和磷酸化组的全景图谱，为理解疾病异质性、开发新型生物标志物奠定了基础。
原文链接：https://febs.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/1878-0261.70032
英国ArrayJet高通量微阵列生物芯片点样仪
ArrayJet位于英国爱丁堡，专注于提供微阵列生物芯片、高通量筛选等应用领域的解决方案及服务，致力于开发快速高通量液体处理平台，目前用户遍布全球。
制备高密度的微阵列生物芯片，用于小分子化合物/蛋白质/多肽/核酸/多糖超高通量筛选
速度快：点样速度711个样片点／秒
通量高：单次进行18432种不同样品的快速点样，具备128个平行喷点通道
精度高： CV<5%（可实现精准的点上点样，实现微型的点对点ELISA反应）
完整的环境控制模块以及防样品蒸发保护（大幅降低点样过程中样品浓度变化）
应用方向：
基因芯片：高通量分子互作验证、疾病功能基因检测或筛选等
蛋白质芯片：高通量功能蛋白质筛选、抗原表位筛选、生物靶点筛选等
多糖芯片：进行高通量糖功能学、糖蛋白、植物凝集素等研究等
小分子化合物芯片：高通量药物筛选、疾病研究、疾病标志物筛选等
镀金SRPi芯片：高通量分子互作研究等
微孔板芯片：高通量多重因子检测、微型ELISA等
微流控芯片、生物传感器芯片：药物研发、体外诊断、生物半导体研发等
临床快检POCT芯片：抗原抗体检测、过敏原检测、病原微生物检测等
蛋白磷酸化是调控细胞信号的关键翻译后修饰，与 CLL 的信号通路密切相关，如 B 细胞抗原受体（BCR）的 tonic 信号传导（低水平持续激活）在 CLL 发展中起关键作用，涉及 LYN、SYK 等酪氨酸激酶。现有治疗如 BTK 抑制剂（伊布替尼）和 BCL-2 抑制剂（维奈托克）虽有效，但存在耐药性和自身微环境影响等问题，且缺乏早期诊断和个性化治疗的生物标志物。整合蛋白质芯片和质谱等高通量筛选技术为分析蛋白质组的磷酸化提供了可能。
文章题目为“Tonic signaling of the B-cell antigen-specific receptor is a common functional hallmark in chronic lymphocytic leukemia cell phosphoproteomes at early disease stages”于2025年3月发表在Molecular Oncology杂志，作者来自西班牙萨拉曼卡大学肿瘤研究中心。
在本研究中，研究对象为 19 例CLL样患者（18 例 B-CLL 和 1 例 CLL ）。首先采集外周血（PB），通过流式细胞仪纯化 CD19⁺、CD5⁺的肿瘤 B 细胞，纯度 > 98%，冻存于液氮中备用。然后使用含尿素的裂解缓冲液（尿素、磷酸酶抑制剂等）裂解细胞，超声处理后离心收集上清液，并测定蛋白浓度。通过磷酸酪氨酸抗体免疫亲和法富集磷酸肽，使用质谱仪分析总蛋白和磷酸化肽段。蛋白组分析检测到 13504 个独特肽段，对应 2970 个蛋白质，其中 28 个为新发现蛋白；蛋白磷酸化分析鉴定到 594 个磷酸肽段，对应 316 个磷酸化蛋白，包括 55 个新发现磷酸肽段。
随后，使用英国ArrayJet微阵列生物芯片点样仪制备蛋白质芯片，检测磷酸化蛋白表达。将 208 种抗体（靶向 162 种蛋白）点印在氨基修饰的玻片上，随后孵育生物素标记的蛋白以及Cy5标记的链霉亲和素， 杂交后使用微阵列荧光芯片扫描仪进行荧光信号分析。
图1：本研究的工作流程。从蛋白质组学和磷酸化蛋白质组学分析到亲和蛋白质组学（蛋白质微阵列）和WB验证。B-CLL： b细胞慢性淋巴细胞白血病；CLL：慢性淋巴细胞白血病；ESI-HCD：高能碰撞解离的电喷雾电离；（ESI）LC-MS /MS：液相色谱串联质谱；MBL：单克隆b细胞淋巴细胞增多症；PTM：翻译后修饰；WB：western blot。
研究发现在2160个共表达蛋白中，有10%（220 个）发生了磷酸化，其主要参与 B 细胞激活和信号转导；发现了BCR的 tonic 信号传导和 NF-κB/STAT3 通路是CLL和 MBL 磷酸化组的共同特征。55 个新磷酸肽的发现扩展了 CLL 磷酸化组数据库，为机制研究提供了可能的潜在靶点，并发现9个磷酸化蛋白（如 BTK、SYK）与早期疾病阶段高度相关，可用于预后评估和治疗监测。整合多组学技术（质谱、蛋白质高通量筛选芯片），提供了CLL蛋白质组和磷酸化组的全景图谱，为理解疾病异质性、开发新型生物标志物奠定了基础。
原文链接：https://febs.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/1878-0261.70032
英国ArrayJet高通量微阵列生物芯片点样仪
ArrayJet位于英国爱丁堡，专注于提供微阵列生物芯片、高通量筛选等应用领域的解决方案及服务，致力于开发快速高通量液体处理平台，目前用户遍布全球。
制备高密度的微阵列生物芯片，用于小分子化合物/蛋白质/多肽/核酸/多糖超高通量筛选
速度快：点样速度711个样片点／秒
通量高：单次进行18432种不同样品的快速点样，具备128个平行喷点通道
精度高： CV<5%（可实现精准的点上点样，实现微型的点对点ELISA反应）
完整的环境控制模块以及防样品蒸发保护（大幅降低点样过程中样品浓度变化）
应用方向：
基因芯片：高通量分子互作验证、疾病功能基因检测或筛选等
蛋白质芯片：高通量功能蛋白质筛选、抗原表位筛选、生物靶点筛选等
多糖芯片：进行高通量糖功能学、糖蛋白、植物凝集素等研究等
小分子化合物芯片：高通量药物筛选、疾病研究、疾病标志物筛选等
镀金SRPi芯片：高通量分子互作研究等
微孔板芯片：高通量多重因子检测、微型ELISA等
微流控芯片、生物传感器芯片：药物研发、体外诊断、生物半导体研发等
临床快检POCT芯片：抗原抗体检测、过敏原检测、病原微生物检测等
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