方案摘要：新城疫（Infection with Newcastledisease virus，newcastle disease,ND），在中国属二类动物疫病病。OIE将其列为A类疫病。是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的一种主要传染病。本方案通过使用Fluidot 24 道自动移液工作站，可快速完成病毒抗原系列倍比稀释，精准控制每孔体积，确保 HA 效价测定准确性；自动添加鸡红细胞悬液，避免入工操作的时间差与污染风险。单次运行可处理多组样本，检测效率提升，有效降低试剂损耗与入力成本，为新城疫病毒 HA 效价的高效、标准化检测提供可靠技术支持。​
 
方案详情：
一、实验原理
新城疫检测（HA 实验）利用新城疫病毒表面的血凝素 - 神经氨酸酶蛋白特性。该蛋白能特异性识别并结合鸡红细胞表面的唾液酸受体，促使红细胞相互连接、聚集，产生肉眼可见的红细胞凝集现象，即血凝。实验时，将新城疫病毒抗原进行倍比稀释，加入鸡红细胞悬液，经孵育后观察。能使红细胞完全凝集的病毒最高稀释度，即为该病毒的血凝效价（HA 效价）。此效价用于确定后续 HI 实验中所需的病毒抗原浓度（如 4 个血凝单位），是新城疫病毒抗原活性测定和抗体检测的重要基础 。​
二、‌实验准备
1、设配和材料
① 微型振荡器。
② Fluidot 24 道自动移液工作站及配套耗材。
③ 96孔血凝板。
 

1. 试剂和材料

① PBS。
② 1%鸡红细胞悬液（RBC）。
③ 新城疫病毒标准阳性抗原。
④ 新城疫病毒标准阳性血清。
⑤ 新城疫病毒标准阴性血清。
 
三、实验步骤
1、根据测得抗原或病毒悬液血凝效价配制4单位抗原（4HAU）。4HAU的配制方法如下：假设抗原的血凝效价为8log2（1：256），则4HAU抗原的稀释倍数应是1：64（256除以4），稀释时，将1mL抗原加入63mL PBS中即为4HAU抗原。
2、4HAU检测：4单位抗原应现用现配，在使用前进行标定。将配制的4HAU进行系列稀释，使最终稀释度分别为1：2、1：3、1：4、1：5、1：6和1：7，然后进行血凝试验。如果配制的抗原液为4HAU，则1：4稀释度将给出凝集终点；如果4HAU高于4个单位，可能1：5或1：6为终点；如果较低，可能1：2或1：3为终点。应根据检验结果将抗原稀释度做适当调整，使工作液确为4 HAU。
3、开启Fluidot自动移液工作站，使用连续分液模式，取16个吸头，在96孔V型微量血凝板的第1-11列等量加入25 μL PBS，第12孔加入50 μL PBS。 
4、取8个吸头，在第1列加入25μL血清，充分混匀后移出25μL至第2列，依次类推，倍比稀释至第10列，并从第10列弃除25μL。
5、在第1列~第11列各加入25μL 4HAU抗原，振荡15s，使液体混合均匀，室温静置至少20 min或2℃~8 ℃ 至少60 min。
6、取24个吸头，在96孔板中，每孔加入 25 μL，1%的鸡红细胞悬液，振荡混匀，室温静置20min~40 min或2℃~8℃静置40min~60min，对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。
7、第11列为抗原对照，第12列为PBS对照，每次测定还应设已知效价的标准阳性血清和阴性血清作对照。
五、结果判定
将96孔板倾斜，从背侧观察加样孔底部的红细胞是否呈泪痕状流淌。以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀释信数为该血清的HI抗体效价。只有当阴性血清对照孔血清效价≤2log2，阳性血清对照孔血清效价与标定效价相差≤1个滴度，红细胞对照无自凝现象时，试验结果有效。HI效价≤3log2，判为HI试验阴性；HI效价≥4log2判为HI试验阳性。